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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR问题
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收获的金秋

[交流] 求助PCR问题

我们实验室做一对特异引物PCR扩增，突然出现弥散条带，同样的体系同样的反应条件，用以前扩出来的模板同样弥散，现已经排除排除dNTP、Mg2+及酶的问题，望各位大侠给以下参考意见！谢谢
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1楼 2008-09-15 08:52:26
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.
对于你这种情况，在排除了其他的因素的情况下可能是由于退火温度造成的目的片段特异性不强。建议你提高退火温度，从而增强目的片段的特异性！对于所加入的模板量，循环次数都有可能造成特异性下降，一般循环30次就可以了，模板量也不要加的过多。如果还是出现类似的现象可以采用降落PCR（touchdown pcr).
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多点思维，多点idea
2楼2008-09-15 19:31:32
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gmdp

金虫 (小有名气)
电泳没出问题？
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3楼2008-09-17 23:49:53
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江枫渔火

铜虫 (小有名气)
可以试着提高退火温度，或降低电泳时的电压
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4楼2008-09-18 19:11:24
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shujing2821

铁虫 (初入文坛)
如果marker也呈弥散装的话，可能是胶出现了问题，建议重新配下胶，再跑一遍试试。
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5楼2008-09-19 00:25:51
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