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zyjwl2004木虫 (正式写手)
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PCR无法扩增出产物
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| 如题，我扩了很多次，也尝试了很多条件，都扩不出来，不知道是那里出问题了。引物应该是没有什么问题的，有上海生工合成的，电泳后有引物二聚体。模板DNA也没有什么问题，电泳时质粒有三条带。其他的dNTP和Tag酶是宝生的，问题就是怎么扩都扩不出来，急啊请教各位，我该怎么办?谢谢 |
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足下客
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reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
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我跟楼主碰到过相同的问题，但不知楼主所要扩的基因片段是多大的？ 我扩一个2.8KB的片段，花了我一个多月的时间才摸清条件。 如果片段长度大，建议你使用LA taq酶 和2*GC buffer I 或2*GC buffer II，首选第一种buffer。如果片段长度不大，可以试一下2*taq mix 可能你的退火温度选的也不合适，请问你的GC百分比是多少？ PS：我用的引物都是Invitrogen合成的，从来没出过问题 出现引物二聚体是很正常的，可以用Primer5给你的引物打一下分，一般要在五十分以上才能比较容易地扩出 [ Last edited by 足下客 on 2008-9-14 at 13:21 ] |
7楼2008-09-14 13:18:04
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