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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 红掌DNA提取后，DNA的含量和纯度都很好，但是PCR没结果！！
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a406331686

银虫 (小有名气)

[求助] 红掌DNA提取后，DNA的含量和纯度都很好，但是PCR没结果！！ 已有2人参与

红掌DNA提取后，利用核酸分析仪测定浓度和纯度都很错，纯度大多在2.0-2.2之间，DNA电泳后总是在2000bp处有很亮的条带，并且利用随机引物进行PCR后，PCR结果全为引物二聚体，急寻解决办法！！！！

红掌DNA提取后，DNA的含量和纯度都很好，但是PCR没结果！！
DNA图片.jpg
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1楼 2015-11-07 21:31:23
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-11-09 22:18:33
不知道你是根据什么认为你提的DNA质量和纯度好的？你说的纯度2.0-2.2指的是OD260/OD280吧，如果是这样，那这个纯度并不好，还有你这个图应该是提取的DNA跑的电泳图吧，DNA完整性还行，但是有很多RNA。不知你测OD230值了没有，算一下OD260/OD230，原理自己去百度。最后，不是说DNA提的好就一定能P出结果，PCR的成败还受DNA模板使用量、引物是否合适、体系是否合适、试剂是否都有效等很多因素影响。
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2楼2015-11-08 13:57:39
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普通回帖

xushiqi001

新虫 (小有名气)
恩哼，DNA纯度好OD260/280应该在1.8左右朋友。

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3楼2015-11-08 21:01:49
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xushiqi001

新虫 (小有名气)
看你的胶图。。RNA太多。。楼上正解。

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4楼2015-11-08 21:02:42
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草溪河

铁虫 (著名写手)
电泳似乎效果也不理想，Marker不清楚
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5楼2015-11-08 21:54:32
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a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-11-08 13:57:39
不知道你是根据什么认为你提的DNA质量和纯度好的？你说的纯度2.0-2.2指的是OD260/OD280吧，如果是这样，那这个纯度并不好，还有你这个图应该是提取的DNA跑的电泳图吧，DNA完整性还行，但是有很多RNA。不知你测OD230 ...

我们跑的分子标记，DNA模板是不用去除RNA的，而且RNA残留也不会使PCR跑不出来结果啊！！
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6楼2015-11-09 08:37:40
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upgo123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a406331686 at 2015-11-09 08:37:40
我们跑的分子标记，DNA模板是不用去除RNA的，而且RNA残留也不会使PCR跑不出来结果啊！！...

你的反应体系是多少？引物浓度多少？dNTP浓度多少？
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选择，然后坚持
7楼2015-11-09 08:57:10
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比永远都要远

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果DNA没有问题的话就应该是你的反应程序或者是反应体系的问题了
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8楼2015-11-09 09:27:39
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a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by upgo123 at 2015-11-09 08:57:10
你的反应体系是多少？引物浓度多少？dNTP浓度多少？...

引物浓度10umol/L，dNTP浓度是2.5mMol/L，反应体系是25uL的体系啊
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9楼2015-11-09 09:32:51
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a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 比永远都要远 at 2015-11-09 09:27:39
如果DNA没有问题的话就应该是你的反应程序或者是反应体系的问题了

我只是想知道电泳图中那个2000bp的很亮的条带是什么？？我们以前从来没出现过这种现象，以前有RNA也是会在下面弥散的一片，不会在2000bp处形成条带啊
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10楼2015-11-09 09:45:16
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