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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 11家族糖苷水解酶将N末端的His tag改到C末端之后，酶活急剧下降的原因
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 11家族糖苷水解酶将N末端的His tag改到C末端之后，酶活急剧下降的原因 已有2人参与

各位，我想知道11家族糖苷水解酶将N末端的His tag改到C末端之后，酶活急剧下降的原因，之前有个比我大的师哥做过一种11家族糖苷水解酶酶活很高达到9000左右，但是我现在把His tag从之前的N末端换到C末端之后，蛋白浓度提取的很纯很浓，但是侧酶活却只有很少一点，我想知道这大概是什么原因呢？各位帮我想一下吧，谢谢
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1楼 2015-11-05 11:12:36
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
大家帮忙啊
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2楼2015-11-05 14:24:53
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onion77

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:32:06
这样现象也不少见。可能C末端是整个酶功能单位的一部分，加上His-tag阻碍了活性中心识别底物或者直接影响了酶的三维结构。
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3楼2015-11-05 15:25:53
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by onion77 at 2015-11-05 15:25:53
这样现象也不少见。可能C末端是整个酶功能单位的一部分，加上His-tag阻碍了活性中心识别底物或者直接影响了酶的三维结构。

其实这两个末端离催化中心都算是比较远啊，我的酶催化中心在200和100左右，C末端应该不会是酶功能单位的一部分吧。再就是我的实验必须要把HIS tag放到C末端的，想在此基础上改造这个酶，要怎么做啊
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4楼2015-11-05 15:30:45
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onion77

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:32:15
Mr.四娃: 金币+10 2016-03-03 20:01:46
氨基酸序列是多长啊？ 没有结构或同源结构很难分析的。通常C端对蛋白质功能比N端更重要，所以一般建议把tag加到N端

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5楼2015-11-05 15:56:10
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onion77

新虫 (小有名气)
不要tag不行吗?

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6楼2015-11-05 15:57:23
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lksyb

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你师兄9000多酶活的和你的是同一个序列吗？
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7楼2015-12-11 18:35:47
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lksyb at 2015-12-11 18:35:47
你师兄9000多酶活的和你的是同一个序列吗？

是，但是现在找到原因了，师兄测的方法不对，酶活没那么好

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8楼2015-12-12 07:35:16
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lksyb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2015-12-12 07:35:16
是，但是现在找到原因了，师兄测的方法不对，酶活没那么好
...

囧了。。。不过找到原因就好。

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9楼2015-12-12 08:45:10
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