24小时热门版块排行榜    

查看: 996  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 11家族糖苷水解酶将N末端的His tag改到C末端之后,酶活急剧下降的原因 已有2人参与

各位,我想知道11家族糖苷水解酶将N末端的His tag改到C末端之后,酶活急剧下降的原因,之前有个比我大的师哥做过一种11家族糖苷水解酶酶活很高达到9000左右,但是我现在把His tag从之前的N末端换到C末端之后,蛋白浓度提取的很纯很浓,但是侧酶活却只有很少一点,我想知道这大概是什么原因呢?各位帮我想一下吧,谢谢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lksyb at 2015-12-11 18:35:47
你师兄9000多酶活的和你的是同一个序列吗?

是,但是现在找到原因了,师兄测的方法不对,酶活没那么好

发自小木虫Android客户端
8楼2015-12-12 07:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

onion77

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:32:06
这样现象也不少见。可能C末端是整个酶功能单位的一部分,加上His-tag阻碍了活性中心识别底物或者直接影响了酶的三维结构。
3楼2015-11-05 15:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by onion77 at 2015-11-05 15:25:53
这样现象也不少见。可能C末端是整个酶功能单位的一部分,加上His-tag阻碍了活性中心识别底物或者直接影响了酶的三维结构。

其实这两个末端离催化中心都算是比较远啊,我的酶催化中心在200和100左右,C末端应该不会是酶功能单位的一部分吧。再就是我的实验必须要把HIS tag放到C末端的,想在此基础上改造这个酶,要怎么做啊
4楼2015-11-05 15:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

onion77

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:32:15
Mr.四娃: 金币+10 2016-03-03 20:01:46
氨基酸序列是多长啊? 没有结构或同源结构很难分析的。通常C端对蛋白质功能比N端更重要,所以一般建议把tag加到N端

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-05 15:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见