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关于绝对定量pcr测转基因的拷贝数
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小弟现在想用绝对定量pcr方法测转基因阳性鼠的拷贝数,现在对标准品的配置有些疑问。 通过文献:标准曲线的建立.将含外源基因的质粒与野生型猪gDNA混合,设置含有1、2、4、8和16个转基因拷贝数的标准品对照,具体如下:假设含有转基因片段的质粒大小为abp,野生型猪基因组DNA用量为bng,转基因片段完全随机地头尾相连(或头头相连)插入一条染色体上,由于转基因组猪DNA单倍体(haploid)大小为3*10^9bp,那么bng的转基因阳性猪基因组DNA含有一个转基因拷贝的质量为:(a*b*0.5)/(3*10^9) ng 我的理解是:1个拷贝为: a微升野生猪DNA与a*b*0.5/3*10^9的质粒混合 2个拷贝为:a微升野生猪DNA与刚才2倍的质粒混合 以此类推配另外的标准品。。。 请问这样配置正确吗? 如果有问题,烦请做过的大神告知正确的配置方法,小弟不胜感激 ![]() ![]() |
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