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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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紫禁华夏

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于绝对定量pcr测转基因的拷贝数

小弟现在想用绝对定量pcr方法测转基因阳性鼠的拷贝数,现在对标准品的配置有些疑问。
通过文献:标准曲线的建立.将含外源基因的质粒与野生型猪gDNA混合,设置含有1、2、4、8和16个转基因拷贝数的标准品对照,具体如下:假设含有转基因片段的质粒大小为abp,野生型猪基因组DNA用量为bng,转基因片段完全随机地头尾相连(或头头相连)插入一条染色体上,由于转基因组猪DNA单倍体(haploid)大小为3*10^9bp,那么bng的转基因阳性猪基因组DNA含有一个转基因拷贝的质量为:(a*b*0.5)/(3*10^9) ng
我的理解是:1个拷贝为: a微升野生猪DNA与a*b*0.5/3*10^9的质粒混合
                     2个拷贝为:a微升野生猪DNA与刚才2倍的质粒混合
                     以此类推配另外的标准品。。。
请问这样配置正确吗?
如果有问题,烦请做过的大神告知正确的配置方法,小弟不胜感激
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量,我们用BIOG SYBR Green染料法做完PCR实验,算得的相对定量CT值在30左右,请问老师这个实验结果如何?
2楼2019-12-16 10:47:01
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