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sunxingzz

新虫 (初入文坛)

[求助] 购买的报告基因质粒，转化后涂板，长出的菌落很小 很密什么原因？是正常的吗？如图 已有2人参与

用的pARE-luc(报告基因质粒)转化到DH5α感受态细胞，涂布培养，100mg/ml的氨苄青霉素母液1:1000菌液的量加入，菌落成片 小，做了两次都是这样，望大家指点迷津！！！
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    • 2015-11-04 19:44:35, 2.38 M

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1楼 2015-11-04 19:48:31
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zy_zhaoyuan

铁虫 (初入文坛)
你涂板的时候，菌液的量是不是可以适当减少一点？

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6楼2015-11-15 22:45:27
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nvwangzzh

金虫 (正式写手)

女王
不知道，给你问问学姐吧
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3楼2015-11-15 19:50:06
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51mimi

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-15 22:47:22
是不是涂布多了，你剃度稀释一下，看看哪个量合适，如果看到单克隆菌落大小还不对（特别是小），一个可能污染，一个可能插入片段对宿主有毒性，做个单克隆验证一下就知道了。

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4楼2015-11-15 20:09:01
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唯不忘相思

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-15 22:47:37
用质粒直接做转化，一定要控制质粒用量，因为直接质粒转化，效率一般是非常高的，所以，你应该适当调低质粒用量，而且，我们实验室钙转质粒做转化是不会加无抗摇菌然后涂布，而是转化后直接涂板。你那个板子其实也能用，因为只要能挑取出单菌落，你可以先做菌落PCR检验。
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5楼2015-11-15 21:13:49
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