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sunxingzz

新虫 (初入文坛)

[求助] 购买的报告基因质粒,转化后涂板,长出的菌落很小 很密什么原因?是正常的吗?如图 已有2人参与

用的pARE-luc(报告基因质粒)转化到DH5α感受态细胞,涂布培养,100mg/ml的氨苄青霉素母液1:1000菌液的量加入,菌落成片 小,做了两次都是这样,望大家指点迷津!!!
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  • 2015-11-04 19:44:35, 2.38 M

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唯不忘相思

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-15 22:47:37
用质粒直接做转化,一定要控制质粒用量,因为直接质粒转化,效率一般是非常高的,所以,你应该适当调低质粒用量,而且,我们实验室钙转质粒做转化是不会加无抗摇菌然后涂布,而是转化后直接涂板。你那个板子其实也能用,因为只要能挑取出单菌落,你可以先做菌落PCR检验。
5楼2015-11-15 21:13:49
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查看全部 7 个回答

nvwangzzh

金虫 (正式写手)

女王

不知道,给你问问学姐吧
3楼2015-11-15 19:50:06
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51mimi

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-15 22:47:22
是不是涂布多了,你剃度稀释一下,看看哪个量合适,如果看到单克隆菌落大小还不对(特别是小),一个可能污染,一个可能插入片段对宿主有毒性,做个单克隆验证一下就知道了。

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-15 20:09:01
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zy_zhaoyuan

铁虫 (初入文坛)

你涂板的时候,菌液的量是不是可以适当减少一点?

发自小木虫Android客户端
6楼2015-11-15 22:45:27
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