24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1600  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蛋白小王子6

银虫 (小有名气)

[求助] 请各位大神木虫帮我分析一下WB条带已有2人参与

请各位大神木虫帮我分析WB条带

图1 和图2分别是目的蛋白,图3 是GADPH。我解释一下,一抗孵育过夜,然后急着发光看结果,就一抗洗了4次,5min/次。二抗孵育1h。二抗洗3次, 5min/次。发现目的蛋白背景太黑了。是不是也是一抗特异性不强的缘故啊?
多谢各位虫子,虚心请教。

请各位大神木虫帮我分析一下WB条带
屏幕快照 2015-11-03 下午10.29.45.png


请各位大神木虫帮我分析一下WB条带-1
屏幕快照 2015-11-03 下午10.29.52.png


请各位大神木虫帮我分析一下WB条带-2
屏幕快照 2015-11-03 下午10.31.13.png
回复此楼
读书也不必只读纸做的书,山水可以读,云雨可以读,官场可以读,商界可以读,赌徒和妓女也是书,只在家读书,读了书还是书,无异于整日喝酒、打牌和吸烟土。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白小王子6

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by keke226 at 2015-11-04 13:07:32
过夜是在4℃吗?可以试试一抗稀释到1比1500或2000,一抗浓度低一些会降低一些非特异吸附的。
...

是4度过夜孵育的 好 多谢你

发自小木虫IOS客户端
读书也不必只读纸做的书,山水可以读,云雨可以读,官场可以读,商界可以读,赌徒和妓女也是书,只在家读书,读了书还是书,无异于整日喝酒、打牌和吸烟土。
5楼2015-11-04 13:38:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蛋白小王子6: 金币+15, ★★★很有帮助 2015-11-04 13:38:56
封闭液用的是什么?脱脂奶粉效果比BSA稍好。
    一抗的稀释比例和孵育时间都可以调整一下试试。另外,二抗的孵育时间也可以缩短为30到40分钟试试。
    曝光时间也可以缩短。
    好的结果都是要不断优化实验条件的。

发自小木虫Android客户端
读书廿年倦写字,如今翻书不识志,若知眷书悔前程,无如渔樵未识时。三年担柴熟山性,三年苦网谙水汹,前程在心自倦舒,识志何用书中清。
2楼2015-11-03 23:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白小王子6

银虫 (小有名气)

谢谢KeKe226, 我的一抗是1:1000稀释的 孵育时间过夜9h。我的主要问题是背景值太高,优化一抗可以降低背景值么?

发自小木虫IOS客户端
读书也不必只读纸做的书,山水可以读,云雨可以读,官场可以读,商界可以读,赌徒和妓女也是书,只在家读书,读了书还是书,无异于整日喝酒、打牌和吸烟土。
3楼2015-11-04 13:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蛋白小王子6 at 2015-11-04 13:01:15
谢谢KeKe226, 我的一抗是1:1000稀释的 孵育时间过夜9h。我的主要问题是背景值太高,优化一抗可以降低背景值么?

过夜是在4℃吗?可以试试一抗稀释到1比1500或2000,一抗浓度低一些会降低一些非特异吸附的。

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

读书廿年倦写字,如今翻书不识志,若知眷书悔前程,无如渔樵未识时。三年担柴熟山性,三年苦网谙水汹,前程在心自倦舒,识志何用书中清。
4楼2015-11-04 13:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见