双酶切鉴定 - 分子生物 - PCR相关 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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stl409

11楼2015-11-01 13:54:07

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匿名

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12楼2015-11-02 12:43:20

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Jeanya

13楼2015-11-02 12:57:40

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宁静致远131

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2楼: Originally posted by mcxiaomu1023 at 2015-11-01 09:17:10
同是沦落人啊~！我这几天也是在做双酶切鉴定，跟楼主一样，也是酶切后跑胶没有目的条带，只有最边上的质粒条带，酶切体系也优化过，跑胶电压也调节过，做了N次还是没有。楼主的目的片段多大？以后多多交流啊~

1000bp左右

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天道酬勤

14楼2015-11-03 07:01:59

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3楼: Originally posted by jiangronglu at 2015-11-01 10:16:31
这个存在以下情况：1，转基因的大肠杆菌是否阳性，经菌液pcr鉴定，阳性方可酶切。2，提取的质粒是否有问题，譬如震荡剧烈，断裂之类的。3，酶切位点要合适确认是否正确，此外还需考虑双酶切两个酶的酶切效率，若还是 ...

原来双酶切鉴定都是半小时，后来尝试切了一个半小时，有条带。应该是酶效率不好了。

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天道酬勤

15楼2015-11-03 07:05:41

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12楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2015-11-02 12:43:20
那就是没连上啊

没连上的话，菌液PCR的目的条带如何解释。

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天道酬勤

16楼2015-11-03 07:07:16

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与余成言

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我只做过一次双酶切鉴定，因为我的菌液pcr怎么做都不对，对照也会出条带（迄今不知问题在哪儿），质粒正常，但是没有计算浓度，切出来也就只有上边一条带，但是我觉得可能是浓度太低了，分子量小的那条带太淡了所以看不见吧

17楼2015-11-03 08:51:15

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匿名

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18楼2015-11-03 12:36:56

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足下客

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5楼: Originally posted by 145457367 at 2015-11-01 11:44:16
菌液PCR有出现目的条带，而双酶切无条带，一片空白。把菌液拿去测序用的是通用引物测是失败的测序状态。如何解？

...

你抽提完质粒后用质粒作为模板，做一下PCR，看看有没有你要的目的条带。测序也是，把质粒抽提出来后送去测序看看。如果都没有，可能是你的基因片段丢失。仅供参考。

19楼2015-11-03 12:42:29

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changyuan218

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好高大上的样子，

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20楼2015-11-03 12:44:39

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