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11楼2015-11-01 13:54:07
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
12楼2015-11-02 12:43:20
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13楼2015-11-02 12:57:40
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宁静致远131

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mcxiaomu1023 at 2015-11-01 09:17:10
同是沦落人啊~!我这几天也是在做双酶切鉴定,跟楼主一样,也是酶切后跑胶没有目的条带,只有最边上的质粒条带,酶切体系也优化过,跑胶电压也调节过,做了N次还是没有。楼主的目的片段多大?以后多多交流啊~

1000bp左右

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天道酬勤
14楼2015-11-03 07:01:59
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宁静致远131

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jiangronglu at 2015-11-01 10:16:31
这个存在以下情况:1,转基因的大肠杆菌是否阳性,经菌液pcr鉴定,阳性方可酶切。2,提取的质粒是否有问题,譬如震荡剧烈,断裂之类的。3,酶切位点要合适确认是否正确,此外还需考虑双酶切两个酶的酶切效率,若还是 ...

原来双酶切鉴定都是半小时,后来尝试切了一个半小时,有条带。应该是酶效率不好了。

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天道酬勤
15楼2015-11-03 07:05:41
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宁静致远131

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2015-11-02 12:43:20
那就是没连上啊

没连上的话,菌液PCR的目的条带如何解释。

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天道酬勤
16楼2015-11-03 07:07:16
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与余成言

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我只做过一次双酶切鉴定,因为我的菌液pcr怎么做都不对,对照也会出条带(迄今不知问题在哪儿),质粒正常,但是没有计算浓度,切出来也就只有上边一条带,但是我觉得可能是浓度太低了,分子量小的那条带太淡了所以看不见吧
17楼2015-11-03 08:51:15
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匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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18楼2015-11-03 12:36:56
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足下客

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 145457367 at 2015-11-01 11:44:16
菌液PCR有出现目的条带,而双酶切无条带,一片空白。把菌液拿去测序用的是通用引物测是失败的测序状态。如何解?...

你抽提完质粒后用质粒作为模板,做一下PCR,看看有没有你要的目的条带。测序也是,把质粒抽提出来后送去测序看看。如果都没有,可能是你的基因片段丢失。仅供参考。
19楼2015-11-03 12:42:29
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changyuan218

木虫 (职业作家)

20楼2015-11-03 12:44:39
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