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宁静致远131

金虫 (正式写手)

[交流] 双酶切鉴定

转DH5a后,菌液浑浊正常,菌液PCR鉴定显示有目的基因条带,然而双酶切鉴定的时候为什么没有目的条带,只有最上边的条带,重复几次未果,想知道摇起来的菌是什么东西?
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天道酬勤
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足下客

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 145457367 at 2015-11-01 11:44:16
菌液PCR有出现目的条带,而双酶切无条带,一片空白。把菌液拿去测序用的是通用引物测是失败的测序状态。如何解?...

你抽提完质粒后用质粒作为模板,做一下PCR,看看有没有你要的目的条带。测序也是,把质粒抽提出来后送去测序看看。如果都没有,可能是你的基因片段丢失。仅供参考。
19楼2015-11-03 12:42:29
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mcxiaomu1023

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同是沦落人啊~!我这几天也是在做双酶切鉴定,跟楼主一样,也是酶切后跑胶没有目的条带,只有最边上的质粒条带,酶切体系也优化过,跑胶电压也调节过,做了N次还是没有。楼主的目的片段多大?以后多多交流啊~
2楼2015-11-01 09:17:10
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jiangronglu

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
宁静致远131: 金币+3 2015-11-08 07:30:49
这个存在以下情况:1,转基因的大肠杆菌是否阳性,经菌液pcr鉴定,阳性方可酶切。2,提取的质粒是否有问题,譬如震荡剧烈,断裂之类的。3,酶切位点要合适确认是否正确,此外还需考虑双酶切两个酶的酶切效率,若还是不行可以使用单酶切,分两步进行。

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努力就有收获,人人都能成功
3楼2015-11-01 10:16:31
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rogerqiu

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这种情况说明没有酶切开,可以直接提取质粒送去测序,再比对就行了,毕竟是鉴定不需要执着酶切一种办法。

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既来之,则安之
4楼2015-11-01 11:36:34
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