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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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宁静致远131

金虫 (正式写手)

[交流] 双酶切鉴定

转DH5a后,菌液浑浊正常,菌液PCR鉴定显示有目的基因条带,然而双酶切鉴定的时候为什么没有目的条带,只有最上边的条带,重复几次未果,想知道摇起来的菌是什么东西?
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天道酬勤
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与余成言

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我只做过一次双酶切鉴定,因为我的菌液pcr怎么做都不对,对照也会出条带(迄今不知问题在哪儿),质粒正常,但是没有计算浓度,切出来也就只有上边一条带,但是我觉得可能是浓度太低了,分子量小的那条带太淡了所以看不见吧
17楼2015-11-03 08:51:15
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mcxiaomu1023

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同是沦落人啊~!我这几天也是在做双酶切鉴定,跟楼主一样,也是酶切后跑胶没有目的条带,只有最边上的质粒条带,酶切体系也优化过,跑胶电压也调节过,做了N次还是没有。楼主的目的片段多大?以后多多交流啊~
2楼2015-11-01 09:17:10
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jiangronglu

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
宁静致远131: 金币+3 2015-11-08 07:30:49
这个存在以下情况:1,转基因的大肠杆菌是否阳性,经菌液pcr鉴定,阳性方可酶切。2,提取的质粒是否有问题,譬如震荡剧烈,断裂之类的。3,酶切位点要合适确认是否正确,此外还需考虑双酶切两个酶的酶切效率,若还是不行可以使用单酶切,分两步进行。

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努力就有收获,人人都能成功
3楼2015-11-01 10:16:31
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rogerqiu

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这种情况说明没有酶切开,可以直接提取质粒送去测序,再比对就行了,毕竟是鉴定不需要执着酶切一种办法。

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既来之,则安之
4楼2015-11-01 11:36:34
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