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long0316

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达重组蛋白纯化出现沉淀

最近用BL21表达一重组蛋白,带His标签,用200mM咪唑解离目的蛋白,整个过程都没有问题,只是将目的蛋白进行稀释时出现絮状沉淀,不知道什么原因,哪位有过相似的经历或知道原因的还望不吝赐教
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用什么溶液稀释的?buffer不合适?
2楼2015-10-28 15:33:13
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long0316

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-28 15:33:13
用什么溶液稀释的?buffer不合适?

就是用解离缓冲液稀释的,含200mM咪唑的Tris缓冲液
3楼2015-10-29 13:18:28
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没遇到过,估计是稀释的过程中PH的变化引起的。先G-25把咪唑除掉,然后在试试。祝顺利。
4楼2015-10-29 13:34:42
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

5楼2015-10-30 10:05:19
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long0316

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-30 10:05:19
既然这样,过柱的时候为何不直接用大量的200mM咪唑的解离buffer洗脱目的蛋白?洗脱的又干净,还达到了稀释的目的。

公司要求保存规格浓度是一定的,直接解离浓度不好控制,而且感觉这个特别奇怪,想搞清楚下原因
6楼2015-10-30 16:28:28
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2015-10-31 00:04:08
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