24小时热门版块排行榜    

查看: 1544  |  回复: 6

long0316

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达重组蛋白纯化出现沉淀

最近用BL21表达一重组蛋白,带His标签,用200mM咪唑解离目的蛋白,整个过程都没有问题,只是将目的蛋白进行稀释时出现絮状沉淀,不知道什么原因,哪位有过相似的经历或知道原因的还望不吝赐教
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用什么溶液稀释的?buffer不合适?
2楼2015-10-28 15:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long0316

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-28 15:33:13
用什么溶液稀释的?buffer不合适?

就是用解离缓冲液稀释的,含200mM咪唑的Tris缓冲液
3楼2015-10-29 13:18:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没遇到过,估计是稀释的过程中PH的变化引起的。先G-25把咪唑除掉,然后在试试。祝顺利。
4楼2015-10-29 13:34:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

5楼2015-10-30 10:05:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long0316

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-30 10:05:19
既然这样,过柱的时候为何不直接用大量的200mM咪唑的解离buffer洗脱目的蛋白?洗脱的又干净,还达到了稀释的目的。

公司要求保存规格浓度是一定的,直接解离浓度不好控制,而且感觉这个特别奇怪,想搞清楚下原因
6楼2015-10-30 16:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2015-10-31 00:04:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 long0316 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:10 by 7huP8NPKZCp9
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 17:58 by 7huP8NPKZCp9
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 17:58 by 7huP8NPKZCp9
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 9/450 2026-08-15 17:46 by 7huP8NPKZCp9
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 6/300 2026-08-15 17:34 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +27 医学老男孩 2026-08-13 58/2900 2026-08-15 15:57 by GZUZM
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +7 majunge000 2026-08-11 9/450 2026-08-15 13:34 by kiz2011
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见