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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 原核表达重组蛋白纯化出现沉淀
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long0316

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达重组蛋白纯化出现沉淀

最近用BL21表达一重组蛋白，带His标签，用200mM咪唑解离目的蛋白，整个过程都没有问题，只是将目的蛋白进行稀释时出现絮状沉淀，不知道什么原因，哪位有过相似的经历或知道原因的还望不吝赐教
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1楼 2015-10-28 15:25:57
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用什么溶液稀释的？buffer不合适？
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2楼2015-10-28 15:33:13
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long0316

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-28 15:33:13
用什么溶液稀释的？buffer不合适？

就是用解离缓冲液稀释的，含200mM咪唑的Tris缓冲液
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3楼2015-10-29 13:18:28
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没遇到过，估计是稀释的过程中PH的变化引起的。先G-25把咪唑除掉，然后在试试。祝顺利。
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4楼2015-10-29 13:34:42
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2015-10-30 10:05:19
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long0316

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-30 10:05:19
既然这样，过柱的时候为何不直接用大量的200mM咪唑的解离buffer洗脱目的蛋白?洗脱的又干净，还达到了稀释的目的。

公司要求保存规格浓度是一定的，直接解离浓度不好控制，而且感觉这个特别奇怪，想搞清楚下原因
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6楼2015-10-30 16:28:28
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-10-31 00:04:08
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