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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 构建植物表达载体pbi121的困惑
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龚小亮

新虫 (小有名气)

[求助] 构建植物表达载体pbi121的困惑 已有2人参与

构建植物表达载体上的疑惑：载体是pbi21，将用来转化拟南芥，构建的过程中，我用双酶（Xba I和SmaI)酶切，后酶连我的目的片段，直接使用的是pbi121自身携带的35s启动子，没有去掉终止密码子（TAG），后面保留有GUS。   我这样做行吗？
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1楼 2015-10-22 20:11:29
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
龚小亮: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢您的解答 2015-10-22 20:41:46
你这样做，转化株没有gus活性的

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2楼2015-10-22 20:34:39
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龚小亮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-10-22 20:34:39
你这样做，转化株没有gus活性的

我只需要验证我基因的功能，不需要知道定位情况，这样做的话，可以达到我的目标吗？  GUS一定不会表达吗？  谢谢你
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3楼2015-10-22 20:41:22
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 龚小亮 at 2015-10-22 20:41:22
我只需要验证我基因的功能，不需要知道定位情况，这样做的话，可以达到我的目标吗？  GUS一定不会表达吗？  谢谢你...

至少，你这个载体就不好构

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4楼2015-10-22 21:05:31
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龚小亮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-10-22 21:05:31
至少，你这个载体就不好构
...

我现在已经将我的目的基因连上去了，测序也正确，也就是说重组质粒已经构建好。  偶然的机会跟同学交流，说我的这个可能不行，需要启动子+目的基因+终止子的方式才能行。我现在担心，我构建的这个重组质粒没法使用，恳请前辈直接说明厉害关系，如果能直接否定我之前的构建方式，我接下来需要重新构建质粒了。恳请前辈多多指点，这样做可行与否。
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5楼2015-10-22 22:46:09
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得可以啊，我就是这么做的，你这么说难道我也错了？我都转到烟草里了

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6楼2015-10-22 23:54:36
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yvonne9044

新虫 (正式写手)
我跟你还有点不一样，我把gus也切掉了……

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7楼2015-10-23 00:01:23
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guanhr515

新虫 (初入文坛)
亲，我现在也想构建重组载体，可是我的pbi121质粒有问题，亲，可以接我一点点质粒或者菌液，如若提供。不胜感激，货到付款

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8楼2016-04-06 11:18:46
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凌风听雨

新虫 (初入文坛)
我也把 gus切掉了，然后转油菜，怎么确定转成功了，pcr？

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9楼2016-05-29 01:07:31
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wangrh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 凌风听雨 at 2016-05-29 01:07:31
我也把 gus切掉了，然后转油菜，怎么确定转成功了，pcr？

你用的那两个酶切位点
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10楼2016-12-10 10:32:15
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