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龚小亮

新虫 (小有名气)

[求助] 构建植物表达载体pbi121的困惑 已有2人参与

构建植物表达载体上的疑惑:载体是pbi21,将用来转化拟南芥,构建的过程中,我用双酶(Xba I和SmaI)酶切,后酶连我的目的片段,直接使用的是pbi121自身携带的35s启动子,没有去掉终止密码子(TAG),后面保留有GUS。   我这样做行吗?
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 龚小亮 at 2015-10-22 20:41:22
我只需要验证我基因的功能,不需要知道定位情况,这样做的话,可以达到我的目标吗?  GUS一定不会表达吗?  谢谢你...

至少,你这个载体就不好构

发自小木虫Android客户端
4楼2015-10-22 21:05:31
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
龚小亮: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢您的解答 2015-10-22 20:41:46
你这样做,转化株没有gus活性的

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-22 20:34:39
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龚小亮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-10-22 20:34:39
你这样做,转化株没有gus活性的

我只需要验证我基因的功能,不需要知道定位情况,这样做的话,可以达到我的目标吗?  GUS一定不会表达吗?  谢谢你
3楼2015-10-22 20:41:22
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龚小亮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-10-22 21:05:31
至少,你这个载体就不好构
...

我现在已经将我的目的基因连上去了,测序也正确,也就是说重组质粒已经构建好。  偶然的机会跟同学交流,说我的这个可能不行,需要启动子+目的基因+终止子的方式才能行。我现在担心,我构建的这个重组质粒没法使用,恳请前辈直接说明厉害关系,如果能直接否定我之前的构建方式,我接下来需要重新构建质粒了。恳请前辈多多指点,这样做可行与否。
5楼2015-10-22 22:46:09
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