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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有没有人做过细菌细胞壁破碎的实验
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adiosaran

新虫 (初入文坛)

[求助] 有没有人做过细菌细胞壁破碎的实验 已有1人参与

因为要提胞内酶，所以要破碎细菌，要保证胞内酶的活性，胞内酶的最适温度是20度，用什么办法比较好，求详细的实验步骤，谢谢呐≧﹏≦

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1楼 2015-10-21 20:02:10
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biotomorrow

金虫 (著名写手)
SDS-CTAB法，研磨仪。。。好多的

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2楼2015-10-22 08:19:59
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adiosaran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biotomorrow at 2015-10-22 08:19:59
SDS-CTAB法，研磨仪。。。好多的

我不提DNA哦，是提活性蛋白，所以要比较温和的方法呢

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3楼2015-10-22 09:24:58
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
adiosaran: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-10-23 16:44:20
呜呜，细胞破碎的方法很多啊，比如超声，比如溶菌酶消化，比如反复冻融，比如高压匀浆等，20度的酶都不会失活，因为我做过20度的酶。祝顺利。
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4楼2015-10-22 09:49:33
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adiosaran

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by hc-material at 2015-10-22 09:49:33
呜呜，细胞破碎的方法很多啊，比如超声，比如溶菌酶消化，比如反复冻融，比如高压匀浆等，20度的酶都不会失活，因为我做过20度的酶。祝顺利。

溶菌酶不是要求温度37度吗，你是怎么做的呀，能说的详细点不，谢谢呐

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5楼2015-10-22 13:50:29
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by adiosaran at 2015-10-22 13:50:29
溶菌酶不是要求温度37度吗，你是怎么做的呀，能说的详细点不，谢谢呐
...

我都是用的超声和高压匀浆。这个还要详细点啊

少量的就超声，细胞用缓冲液溶解后，冰浴中超声，超2秒停5秒，400的功率。

量大就匀浆，匀浆都是在4度进行的。1200出口压力，进口40.祝顺利。
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6楼2015-10-22 15:47:29
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adiosaran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hc-material at 2015-10-22 15:47:29
我都是用的超声和高压匀浆。这个还要详细点啊

少量的就超声，细胞用缓冲液溶解后，冰浴中超声，超2秒停5秒，400的功率。

量大就匀浆，匀浆都是在4度进行的。1200出口压力，进口40.祝顺利。...

你的缓冲液用的是啥，PBS吗？一般用量是多少呀？还有，我用纯水可以吗？谢谢呐

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7楼2015-10-23 00:05:58
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adiosaran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by adiosaran at 2015-10-23 00:05:58
你的缓冲液用的是啥，PBS吗？一般用量是多少呀？还有，我用纯水可以吗？谢谢呐
...

对了，我的菌是革兰氏阴性，超声多少次合适呀

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8楼2015-10-23 00:07:27
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by adiosaran at 2015-10-23 00:07:27
对了，我的菌是革兰氏阴性，超声多少次合适呀
...

用的PBS，菌比液1:20,超20分钟可以啦，祝顺利
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9楼2015-10-23 09:02:56
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adiosaran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hc-material at 2015-10-23 09:02:56
用的PBS，菌比液1:20,超20分钟可以啦，祝顺利...

好哒好哒，谢谢你呐(^.^)，我怎么给你评分啊，好尴尬……

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10楼2015-10-23 16:43:51
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