24小时热门版块排行榜    

查看: 2667  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求Raw细胞转染方法,已然处于崩溃的边缘,求大神指点! 已有3人参与

有没有人做过Raw细胞转染啊?近两三个月了,一直卡在Raw细胞过表达实验上,没有一点进展。简直要崩溃了。尝试过换转染试剂,也各种摸索浓度条件,依然转染效率低于10%。最近刚换了罗氏的转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent,昨天试了一次,效果依然不理想。不知道是怎么回事。我转染之前细胞密度在50%左右,说明书上写的是转染前细胞密度在70%-90%,想问下细胞密度对转染效率影响很大吗?有没有用过这款转染试剂在RAW细胞上转的同志啊?还请指点一二啊。或者有用其它方法转染在Raw细胞上转染质粒的同学,也请不吝赐教。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西湖鸟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主可以看看siRNA设置梯度了吗?最好用带荧光的siRNA对照转转看是否转进去了,RAW264.7本来就不好转染,需要用专用转染试剂才可以,朋友给我推荐了RFect悬浮细胞专用小核酸转染试剂,我用在thp-1细胞上做到70%的转染效率,可能条件需要在优化一下就更好了。
5楼2018-11-14 11:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
三爷111: 金币+5 2015-10-24 10:08:26
如果阳性对照也发现该细胞试剂转染效率很低的话,建议做电转
医学&统计学
2楼2015-10-22 14:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan1993

新虫 (初入文坛)

细胞密度低是转不进去  建议密度高点
3楼2015-10-22 18:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcree

新虫 (初入文坛)

看楼主用的是罗氏的转染试剂,我们之前也用过,但是实验结果不理想。后来换了RFect小核酸转染试剂,做下来结果还可以。操作也挺方便的,你可以试试。
4楼2018-10-08 11:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +5 瞬息宇宙 2026-08-12 5/250 2026-08-13 07:13 by athenadai219
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见