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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 跪求Raw细胞转染方法，已然处于崩溃的边缘，求大神指点！
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三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求Raw细胞转染方法，已然处于崩溃的边缘，求大神指点！ 已有3人参与

有没有人做过Raw细胞转染啊？近两三个月了，一直卡在Raw细胞过表达实验上，没有一点进展。简直要崩溃了。尝试过换转染试剂，也各种摸索浓度条件，依然转染效率低于10%。最近刚换了罗氏的转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent，昨天试了一次，效果依然不理想。不知道是怎么回事。我转染之前细胞密度在50%左右，说明书上写的是转染前细胞密度在70%-90%，想问下细胞密度对转染效率影响很大吗？有没有用过这款转染试剂在RAW细胞上转的同志啊？还请指点一二啊。或者有用其它方法转染在Raw细胞上转染质粒的同学，也请不吝赐教。
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1楼 2015-10-21 15:05:08
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
三爷111: 金币+5 2015-10-24 10:08:26
如果阳性对照也发现该细胞试剂转染效率很低的话，建议做电转
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医学&统计学
2楼2015-10-22 14:28:25
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liyan1993

新虫 (初入文坛)
细胞密度低是转不进去  建议密度高点
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3楼2015-10-22 18:22:34
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lcree

新虫 (初入文坛)
看楼主用的是罗氏的转染试剂，我们之前也用过，但是实验结果不理想。后来换了RFect小核酸转染试剂，做下来结果还可以。操作也挺方便的，你可以试试。
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4楼2018-10-08 11:24:30
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西湖鸟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主可以看看siRNA设置梯度了吗？最好用带荧光的siRNA对照转转看是否转进去了，RAW264.7本来就不好转染，需要用专用转染试剂才可以，朋友给我推荐了RFect悬浮细胞专用小核酸转染试剂，我用在thp-1细胞上做到70%的转染效率，可能条件需要在优化一下就更好了。
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5楼2018-11-14 11:22:19
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很多文献都提到RAW264.7细胞可以做瞬时转，，听我师姐说他们实验室用BIODAI,DNA方法转染COS-7细胞效果不错，转染RAW264.7细胞问题应该也不大，如果楼主决定用电转的话需要控制好电场强度，电场强度过高会增加细胞的死亡率，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前需要测定RAW264.7细胞的最佳电场强度。
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6楼2019-08-27 10:33:54
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