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三爷111

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求Raw细胞转染方法,已然处于崩溃的边缘,求大神指点! 已有3人参与

有没有人做过Raw细胞转染啊?近两三个月了,一直卡在Raw细胞过表达实验上,没有一点进展。简直要崩溃了。尝试过换转染试剂,也各种摸索浓度条件,依然转染效率低于10%。最近刚换了罗氏的转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent,昨天试了一次,效果依然不理想。不知道是怎么回事。我转染之前细胞密度在50%左右,说明书上写的是转染前细胞密度在70%-90%,想问下细胞密度对转染效率影响很大吗?有没有用过这款转染试剂在RAW细胞上转的同志啊?还请指点一二啊。或者有用其它方法转染在Raw细胞上转染质粒的同学,也请不吝赐教。
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
三爷111: 金币+5 2015-10-24 10:08:26
如果阳性对照也发现该细胞试剂转染效率很低的话,建议做电转
医学&统计学
2楼2015-10-22 14:28:25
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liyan1993

新虫 (初入文坛)

细胞密度低是转不进去  建议密度高点
3楼2015-10-22 18:22:34
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lcree

新虫 (初入文坛)

看楼主用的是罗氏的转染试剂,我们之前也用过,但是实验结果不理想。后来换了RFect小核酸转染试剂,做下来结果还可以。操作也挺方便的,你可以试试。
4楼2018-10-08 11:24:30
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西湖鸟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主可以看看siRNA设置梯度了吗?最好用带荧光的siRNA对照转转看是否转进去了,RAW264.7本来就不好转染,需要用专用转染试剂才可以,朋友给我推荐了RFect悬浮细胞专用小核酸转染试剂,我用在thp-1细胞上做到70%的转染效率,可能条件需要在优化一下就更好了。
5楼2018-11-14 11:22:19
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很多文献都提到RAW264.7细胞可以做瞬时转,,听我师姐说他们实验室用BIODAI,DNA方法转染COS-7细胞效果不错,转染RAW264.7细胞问题应该也不大,如果楼主决定用电转的话需要控制好电场强度,电场强度过高会增加细胞的死亡率,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前需要测定RAW264.7细胞的最佳电场强度。
6楼2019-08-27 10:33:54
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