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[求助]
---为什么的WB条带是这样？求各位大神指点！！！！！
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 大家帮我看看，为什么我的条带是这样的。总共上传了三次WB结果，三次实验条件基本相同（其中第二次内参一抗为1:1000，第三次内参一抗1:500）。简单说一下我的实验条件:1、电泳：上样量25ul，其他的我都是看电泳跑得到底就停下了。 2、转膜：50mA，25min;（内参和目的蛋白分子量只差几KDa，用一样的转膜条件）; 2、封闭：37°摇床（150r/min）封闭3h； 3、一抗：1:1000（目的蛋白），1:500（内参），4度冰箱孵育过夜，TBST洗三次，每次10min； 4、二抗：1:1000,37°摇床（150r/min）孵育2h，TBST洗三次，每次10min，再TBS洗2次，每次5min； 5、曝光 备注：封闭时间二抗浓度、内参浓度是实验室摸索好的。 请各位大神、以及有相同经验的亲们指点，谢谢啦~  第一次（目的蛋白1）.jpg  第二次（内参）.jpg  第三次（内参）.jpg  第三次（目的蛋白1）.jpg |
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