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my_12345

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质印迹相关问题

本人在做蛋白质印迹时贴的抗体是Bax和Bcl-2，用的是PVDF膜，结果显影之后有好多条带，这是什么原因造成的，我用的是5%的牛奶封闭的，是封闭的不好还使用TBST洗得不干净，不知道是哪里出了问题，请高手指教，谢谢！

蛋白质印迹相关问题
蛋白质印迹
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1楼 2015-10-18 16:15:06
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forcechen

银虫 (小有名气)
你的一抗是多克隆抗体吗？

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2楼2015-10-18 19:11:26
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
可能是一抗不好，我上次也遇到过，后来换了新的一抗就好了

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3楼2015-10-18 23:42:55
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huitu09

银虫 (小有名气)
应该是一抗有问题吧

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4楼2015-10-18 23:48:03
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my_12345

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2015-10-18 23:42:55
可能是一抗不好，我上次也遇到过，后来换了新的一抗就好了

请问是一抗坏了，还是一抗分单克隆抗体和多克隆抗体的原因，有没有可能是我用TBST没有洗干净呢？谢谢
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5楼2015-10-19 19:50:12
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my_12345

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forcechen at 2015-10-18 19:11:26
你的一抗是多克隆抗体吗？

那个怎么看是不是多克隆抗体，我用的好像是，我应该怎么处理才能只有目标条带？是因为我用TBST没有洗干净么？谢谢
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6楼2015-10-19 19:52:36
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by my_12345 at 2015-10-19 19:50:12
请问是一抗坏了，还是一抗分单克隆抗体和多克隆抗体的原因，有没有可能是我用TBST没有洗干净呢？谢谢...

不好意思啊，我们只用单抗，洗不干净之后背景是模糊的，就跟膜掉地上，占了灰的感觉一样，而不是很多条带。我以前也出现过砸出来很多杂带的情况，后来换了新的单抗就好了

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7楼2015-10-19 23:45:14
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forcechen

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by my_12345 at 2015-10-19 19:52:36
那个怎么看是不是多克隆抗体，我用的好像是，我应该怎么处理才能只有目标条带？是因为我用TBST没有洗干净么？谢谢...

多抗就会有多条带，但是背景也有，试一下曝光时间稍微短一些。

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8楼2015-10-20 07:19:57
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