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my_12345

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质印迹相关问题

本人在做蛋白质印迹时贴的抗体是Bax和Bcl-2,用的是PVDF膜,结果显影之后有好多条带,这是什么原因造成的,我用的是5%的牛奶封闭的,是封闭的不好还使用TBST洗得不干净,不知道是哪里出了问题,请高手指教,谢谢!

蛋白质印迹相关问题
蛋白质印迹
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forcechen

银虫 (小有名气)

2楼2015-10-18 19:11:26
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

可能是一抗不好,我上次也遇到过,后来换了新的一抗就好了

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-10-18 23:42:55
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huitu09

银虫 (小有名气)

4楼2015-10-18 23:48:03
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my_12345

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2015-10-18 23:42:55
可能是一抗不好,我上次也遇到过,后来换了新的一抗就好了

请问是一抗坏了,还是一抗分单克隆抗体和多克隆抗体的原因,有没有可能是我用TBST没有洗干净呢?谢谢
5楼2015-10-19 19:50:12
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my_12345

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by forcechen at 2015-10-18 19:11:26
你的一抗是多克隆抗体吗?

那个怎么看是不是多克隆抗体,我用的好像是,我应该怎么处理才能只有目标条带?是因为我用TBST没有洗干净么?谢谢
6楼2015-10-19 19:52:36
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by my_12345 at 2015-10-19 19:50:12
请问是一抗坏了,还是一抗分单克隆抗体和多克隆抗体的原因,有没有可能是我用TBST没有洗干净呢?谢谢...

不好意思啊,我们只用单抗,洗不干净之后背景是模糊的,就跟膜掉地上,占了灰的感觉一样,而不是很多条带。我以前也出现过砸出来很多杂带的情况,后来换了新的单抗就好了

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-10-19 23:45:14
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forcechen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by my_12345 at 2015-10-19 19:52:36
那个怎么看是不是多克隆抗体,我用的好像是,我应该怎么处理才能只有目标条带?是因为我用TBST没有洗干净么?谢谢...

多抗就会有多条带,但是背景也有,试一下曝光时间稍微短一些。

发自小木虫Android客户端
8楼2015-10-20 07:19:57
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