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923158905

铜虫 (小有名气)

[求助] 二相代谢孵育体系溶液配制 已有1人参与

想请教些问题,我做的是葡萄糖醛酸化反应,关于孵育体系的配制,我需要配制四种溶液A(UDPGA);B(D-葡萄糖二酸1,4-内酯,丙甲菌素,MgCl2);C(样品溶液);D(UGT酶溶液),然后将溶液冷冻分装,使用时溶解移取适量体积,使孵育体系总体积为100 uL。
(1)UDPGA不太稳定,是不是不可以配成溶液长期冷冻保存,要现配现用?配成溶液冷冻保存有什么影响?
(2)我能把B溶液和D溶液配制在一起,作为一个溶液吗?                                                                                                                                                                                                                                                                               (3)我只知道反复冻融对酶的活性有影响,所以要将酶溶液分装成小份以减少冻融次数,但其他的溶液(A,B,C)还需要分装成小份进行保存吗?                                                                                                                                                                                                                                                               
(4)丙甲菌素在水中的溶解性怎样啊?可以直接用缓冲液配制吗?
           谢谢大家!
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923158905

铜虫 (小有名气)

问到的另一个回复如下,有同样问题的虫友可以参考一下:
UDPGA通常是现用现配,配好的溶液在-20℃冰箱可以放置,时间最好也不好太长。
B溶液包括辅因子、打孔剂、抑制葡萄糖醛酸水解的抑制剂,B溶液和D溶液最好是分开配制,B溶液中的三个也可以分开配置,这些一般可以放在4℃冰箱里,配一大管,用的时候往体系里面加就行。
除了酶液和UDPGA,其他的稳定性都可以,我们一般是配好了放冰箱,随用随取。
丙甲菌素是多肽,水溶性可以。
7楼2015-10-22 11:06:54
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923158905

铜虫 (小有名气)

没人回复吗?自己顶一下

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-18 10:31:03
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tyityi5

新虫 (小有名气)


丙甲菌素溶解性一般,尝试缓冲液吧
3楼2015-10-19 08:51:31
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man㵘

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
923158905: 金币+30, ★★★很有帮助, 谢谢你的帮助,回答的好详细,赞一个~\(≧▽≦)/~ 2015-10-19 21:46:02
(1)UDPGA要现配现用。如果你真的要配成溶液冷冻,建议挑几个对照化合物,做一下验证实验,看看冷冻后是否有影响。
2)不建议配在一起
3)最好都配成小份,冻存。
(4)丙甲菌素在书中溶解性一般。建议配在DMSO等有机相,配成高浓度,实验时取少量加到反应体系。

PS.做科研,最好每一步都严格按要求来,否则一旦有问题,很难分析原因。如果想节省步奏,改变条件,一定要先做验证实验。
还有个问题,如果你用的是基因工程技术生成的UGT酶,应该就不需要丙甲菌素了吧。我们用microsomes做实验,才加丙甲菌素,目的是穿孔,让UGT释放出来。
Govern your thoughts when alone, and your tongue when in company.
4楼2015-10-19 15:11:21
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