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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 先用透明水解圈的方法筛选产酶好的菌，请高人指点一下刚果红染色法的具体操作啊
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容和buyer

新虫 (小有名气)

[求助] 先用透明水解圈的方法筛选产酶好的菌，请高人指点一下刚果红染色法的具体操作啊 已有3人参与

查了好多文献，都没有具体讲怎么做的。涂好一般的平板后，是要把菌体留在里面倒刚果红，还是移出菌体后倒入刚果红？
如果菌体在里面就倒入刚果红的话，那加入刚果红的要灭菌吗？不灭菌的话，会不会污染菌株啊。而且到了刚果红后还要用生理盐水洗，好难洗下来。请大神给个详细点的操作步骤，谢谢谢谢万分感谢。
而且听说初筛优势菌株（产酶）还有好多种方法，了解一点的虫虫给个普及，希望多交流。谢谢。
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1楼 2015-10-15 18:54:22
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wisemoon1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
容和buyer: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-16 10:12:35
我是高压蒸汽灭完培养基后凉至50℃，直接加入过滤除菌的刚果红，一起倒平板，然后再接菌。省去了NaCl洗涤这一步骤，也会有透明圈产生，而且效果还不错。过滤除菌我们是加入到注射器里，套上无菌滤膜，直接推进培养基中的。如果刚果红不除菌，确实有染杂菌的风险。
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lovemyself
5楼2015-10-16 08:55:31
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专吃虫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以挑几个酶圈大的，对应点在平板上，标记，然后染色原始板，这样就不要灭菌了，如果确定是要的，就做下去

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3楼2015-10-16 07:26:28
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普通回帖

随堂笔迹

金虫 (小有名气)
当然是菌体留在里面直接染，灭菌是肯定的，所有的都要灭菌，无菌操作，至于步骤随便下篇文章就有了，

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2楼2015-10-15 23:49:20
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定一下酶的种类。
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蓝精灵
4楼2015-10-16 08:10:48
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容和buyer

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 专吃虫 at 2015-10-16 07:26:28
你可以挑几个酶圈大的，对应点在平板上，标记，然后染色原始板，这样就不要灭菌了，如果确定是要的，就做下去

挑酶圈大的？没挑之前是看不出酶圈大，就是得通过刚果红染色法来了解的。您这里说的对应点再平板上，是说把菌体移到另外一块平板上了吗？如果是那样，确实不用刚果红就不用灭菌了。
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6楼2015-10-16 10:04:44
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容和buyer

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mlanqiang at 2015-10-16 08:10:48
确定一下酶的种类。

是甘露聚糖酶。
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7楼2015-10-16 10:05:32
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容和buyer

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by wisemoon1988 at 2015-10-16 08:55:31
我是高压蒸汽灭完培养基后凉至50℃，直接加入过滤除菌的刚果红，一起倒平板，然后再接菌。省去了NaCl洗涤这一步骤，也会有透明圈产生，而且效果还不错。过滤除菌我们是加入到注射器里，套上无菌滤膜，直接推进培养基 ...

非常感谢。这应该也是一种方法，可以尝试一下。能再问一下您刚果红用过滤除菌方法，具体一点是如何的。是无菌滤膜原先就放在注射器里面的吗？那这个滤膜直径您选用的是多少呀？另外，为何不采用把刚果红直接灭菌呢，是怕高温灭菌过程中会影响它的结构吗？难得有人做过，希望能交流下。
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8楼2015-10-16 10:12:10
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wisemoon1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 容和buyer at 2015-10-16 10:12:10
非常感谢。这应该也是一种方法，可以尝试一下。能再问一下您刚果红用过滤除菌方法，具体一点是如何的。是无菌滤膜原先就放在注射器里面的吗？那这个滤膜直径您选用的是多少呀？另外，为何不采用把刚果红直接灭菌呢 ...

我们用乙醇配的刚果红溶液，没办法灭菌，所以当时选了0.22的尼龙膜，你在网上搜“灭菌一次性针式过滤器”就可以。如果你的实验等不及购买滤膜，直接称刚果红放到培养基里，再灭菌也可以。
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lovemyself
9楼2015-10-16 11:06:34
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容和buyer

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wisemoon1988 at 2015-10-16 11:06:34
我们用乙醇配的刚果红溶液，没办法灭菌，所以当时选了0.22的尼龙膜，你在网上搜“灭菌一次性针式过滤器”就可以。如果你的实验等不及购买滤膜，直接称刚果红放到培养基里，再灭菌也可以。...

谢谢谢谢。那你们在100 ml培养基里面加了多少量的刚果红溶液呀？
你们用乙醇配刚果红也是为了杀菌吗？一般不都是用水配的吗。
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10楼2015-10-16 13:46:25
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