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maoxuequn

新虫 (小有名气)

[求助] PCR跑胶图 已有3人参与

最近我的胶总是变成这样，各位，我也不知道怎么破，因为都是一样的加样和程序，但是，最近一直出现这个，不晓得什么原因。胶啊，还有各种都没有改变。

PCR跑胶图
IMG_7434.JPG
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1楼 2015-10-13 19:22:18
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湘西小伙儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
maoxuequn: 金币+5, ★有帮助, marker木有了 2015-10-18 20:45:26
怎么都没maker啊，做个对照，看看是电泳系统的问题还是你的DNA降解了或者是在提取DNA的过程中把基因组的DNA给弄断了
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8楼2015-10-14 19:50:54
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普通回帖

反应链

新虫 (正式写手)
当我遇到这种情况的时候，首先把模板和引物换了，用质粒和相应的引物扩增。因为质粒是最容易扩增的，可以快速确定PCR仪、扩增体系、电泳条件等有没有问题。一般都没有问题的，确定后再使用新稀释的DNA和引物，原来是降解了。
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2楼2015-10-13 19:46:27
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maoxuequn

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-10-13 19:46:27
当我遇到这种情况的时候，首先把模板和引物换了，用质粒和相应的引物扩增。因为质粒是最容易扩增的，可以快速确定PCR仪、扩增体系、电泳条件等有没有问题。一般都没有问题的，确定后再使用新稀释的DNA和引物，原来是 ...

这是植物提取的DNA，降解的可能真的比较大，差不多也有近2年的时间了。就是也算是突然出现吧，因为之前一次的几次都没有这种情况出现，
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3楼2015-10-13 20:55:42
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kodey

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
maoxuequn: 金币+15, ★★★很有帮助 2015-10-18 20:43:55
模板少加些，提高一下PCR退火温度试试。
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4楼2015-10-14 10:18:36
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我心中有猛虎

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
maoxuequn: 金币+10, ★有帮助, 40° 2015-10-18 20:44:21
maoxuequn: 金币+20, ★有帮助 2015-10-18 20:46:38
退火温度多少啊，提高退火温度4一下，引物特异性不强？
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5楼2015-10-14 12:32:43
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
建议提高退火温度试试，或者换其他聚合酶试试

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maoxuequn
只要有梦想，坚持就一定能实现
6楼2015-10-14 12:37:12
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董小露

金虫 (小有名气)

小牛
楼主你解决这个问题了么，我做的也是这样的
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7楼2015-10-14 17:45:35
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j2008315

新虫 (初入文坛)
感觉不是模板降解的问题，酶和pcr仪出问题的可能性更大

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maoxuequn
9楼2015-10-14 20:13:57
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maoxuequn

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kodey at 2015-10-14 10:18:36
模板少加些，提高一下PCR退火温度试试。

恩恩，我导师说是退火温度的原因，我还在继续探索
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10楼2015-10-18 20:43:44
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