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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 哪些taq酶的pcr产物能直接TA克隆？
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 哪些taq酶的pcr产物能直接TA克隆？

如题，请问takara的EX-taq产物能直接克隆吗？有些pfu plus 混合taq的pcr产物能直接TA克隆吗？另外，我做PCR是为了克隆表达，请问用哪种酶保真性高？
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1楼 2008-09-05 08:51:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)
只要是taq-bace的酶或者含有Taq的混合酶就具有3‘加A的能力，除非是那种经过特殊改造的抹平末端的Taq，但是好像没听说有这样的Taq出现，如果用Pfu能保证保真性但是都是产生平末端的，要得到3’加A还要保证保真性那就用Taq和Pfu的混合酶，或者用Pfu扩增再在3‘端加A，加一步操作嘛。
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8楼2009-05-21 10:56:52
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):谢谢参与 5-18 19:29
takara的EX-taq酶的扩增产物有A尾巴，可以直接连接T载体；
pfu酶的保真性较好，可以用该酶扩增目的片段结束后，再加A尾巴
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2楼2008-09-05 08:55:35
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hqhe

木虫 (正式写手)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):谢谢参与 5-18 19:29
应该说普通的taq酶都具有末端加A的功能，因此可以用于T-A克隆，具体的你只要上公司的网页看一下产品说明就可以了，这样是最可靠的
taq酶的保真性也还可以的，如果基因片段在2000以下一般是没有问题的，反正我做1500左右的片段从来就没有引入非期待突变过
pfu的保真性还是很高的，如果片段长建议使用它
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3楼2008-09-05 08:58:26
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biobo

铁虫 (小有名气)
ExTaq酶和rTaq酶PCR反应后都有突出的A，因此可以TA克隆；
但是高保真酶就不可以，因此，你必须反应后加A。
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4楼2008-09-05 09:14:16
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