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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 哪些taq酶的pcr产物能直接TA克隆?

如题,请问takara的EX-taq产物能直接克隆吗?有些pfu plus 混合taq的pcr产物能直接TA克隆吗?另外,我做PCR是为了克隆表达,请问用哪种酶保真性高?
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greenspringmi

银虫 (正式写手)


sutao1979(金币+1,VIP+0):谢谢参与 5-18 19:29
takara的EX-taq酶的扩增产物有A尾巴,可以直接连接T载体;
pfu酶的保真性较好,可以用该酶扩增目的片段结束后,再加A尾巴
2楼2008-09-05 08:55:35
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hqhe

木虫 (正式写手)


sutao1979(金币+1,VIP+0):谢谢参与 5-18 19:29
应该说普通的taq酶都具有末端加A的功能,因此可以用于T-A克隆,具体的你只要上公司的网页看一下产品说明就可以了,这样是最可靠的
taq酶的保真性也还可以的,如果基因片段在2000以下一般是没有问题的,反正我做1500左右的片段从来就没有引入非期待突变过
pfu的保真性还是很高的,如果片段长建议使用它
3楼2008-09-05 08:58:26
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biobo

铁虫 (小有名气)

ExTaq酶和rTaq酶PCR反应后都有突出的A,因此可以TA克隆;
但是高保真酶就不可以,因此,你必须反应后加A。
4楼2008-09-05 09:14:16
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ningluztt

铜虫 (小有名气)

Taq与pfu混合使用可以实现高保真同时加A的效果
5楼2008-09-05 10:12:52
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

真好需要,学习了。。。
6楼2009-05-18 19:26:25
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lyjie

新虫 (初入文坛)

就是。建议不错
7楼2009-05-20 22:53:26
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amilie030312

金虫 (正式写手)

只要是taq-bace的酶或者含有Taq的混合酶就具有3‘加A的能力,除非是那种经过特殊改造的抹平末端的Taq,但是好像没听说有这样的Taq出现,如果用Pfu能保证保真性但是都是产生平末端的,要得到3’加A还要保证保真性那就用Taq和Pfu的混合酶,或者用Pfu扩增再在3‘端加A,加一步操作嘛。
8楼2009-05-21 10:56:52
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legend0463

金虫 (小有名气)

除了pfu酶之外的Taq酶,其PCR产物末端应该都有A,都可以用做T-A克隆
9楼2009-05-31 16:41:56
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