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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] 原核表达已有3人参与

我在做咖啡碱合成途径中AMP脱氨酶的原核表达,ORF 为2571bp,现已连接pmal-c5x,转化到novablue(DE),这个感受态是借来的,他们说pmal质粒用这个好。于是我采用他们的最佳诱导条件:28度24h。但结果好像不理想。                                                                                                                                       由于我是新手,想问以下问题:
1. 表达菌株相同而目的基因不同, 最佳诱导条件是否相同?如果同一个目的基因使用了不同的表达菌株,是否相同呢?  

2.怎么选择最佳表达菌株,主要看哪几点?

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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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Deng_Cheng: 金币+3 2015-10-19 15:11:47
一般来说,我们会很据基因的情况去查一些资料,然后对该基因分析并优化。
目的基因不一样,一般来说诱导表达的条件也不一样,与宿主细胞的关系不算太大
表达最佳菌株重点有很多,但比较主要的是诱导表达条件的筛选,一般的蛋白表达纯化对于表达条件都需要进行梯度筛选,摸索最优表达情况,这个最麻烦了。。。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
6楼2015-10-12 17:07:54
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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Deng_Cheng: 金币+4, 有帮助 2015-10-12 16:24:02
1.目的基因不同蛋白表达很可能不同,最佳诱导条件未必相同;一个目的基因不同表达菌株,也不尽相同;
2.建议尝试不同载体、不同表达菌株、不同诱导条件,可能会有好的结果。
2楼2015-10-12 15:26:04
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黄金闪闪亮

铜虫 (小有名气)


作为本科毕业多年直到此刻又从事本行的我表示不懂
3楼2015-10-12 15:45:22
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-12 15:26:04
1.目的基因不同蛋白表达很可能不同,最佳诱导条件未必相同;一个目的基因不同表达菌株,也不尽相同;
2.建议尝试不同载体、不同表达菌株、不同诱导条件,可能会有好的结果。

谢谢,还想请问一下,对于我的2571bp的基因,用什么原核表达载体比较好,选择载体要对基因进行哪些分析吗?同样,选择表达菌株要对基因进行哪些分析呢?
4楼2015-10-12 16:23:24
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