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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 原核表达
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] 原核表达 已有3人参与

我在做咖啡碱合成途径中AMP脱氨酶的原核表达，ORF 为2571bp，现已连接pmal-c5x，转化到novablue(DE)，这个感受态是借来的，他们说pmal质粒用这个好。于是我采用他们的最佳诱导条件：28度24h。但结果好像不理想。                                                                                                                                       由于我是新手，想问以下问题：
1. 表达菌株相同而目的基因不同， 最佳诱导条件是否相同？如果同一个目的基因使用了不同的表达菌株，是否相同呢？  

2.怎么选择最佳表达菌株，主要看哪几点？

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1楼 2015-10-12 00:41:15
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, ★有帮助 2015-10-12 16:24:02
1.目的基因不同蛋白表达很可能不同，最佳诱导条件未必相同；一个目的基因不同表达菌株，也不尽相同；
2.建议尝试不同载体、不同表达菌株、不同诱导条件，可能会有好的结果。
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2楼2015-10-12 15:26:04
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黄金闪闪亮

铜虫 (小有名气)
作为本科毕业多年直到此刻又从事本行的我表示不懂
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3楼2015-10-12 15:45:22
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-12 15:26:04
1.目的基因不同蛋白表达很可能不同，最佳诱导条件未必相同；一个目的基因不同表达菌株，也不尽相同；
2.建议尝试不同载体、不同表达菌株、不同诱导条件，可能会有好的结果。

谢谢，还想请问一下，对于我的2571bp的基因，用什么原核表达载体比较好，选择载体要对基因进行哪些分析吗？同样，选择表达菌株要对基因进行哪些分析呢？
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4楼2015-10-12 16:23:24
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-10-12 16:23:24
谢谢，还想请问一下，对于我的2571bp的基因，用什么原核表达载体比较好，选择载体要对基因进行哪些分析吗？同样，选择表达菌株要对基因进行哪些分析呢？...

具体用什么载体我也说不好，基因分析我也没那个经验，可以看看是否有稀有密码子什么的。但是这个蛋白已经不小，大标签的载体可能表达效果不好。还是那句话，这个没固定的，多尝试才行
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5楼2015-10-12 16:50:33
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+3 2015-10-19 15:11:47
一般来说，我们会很据基因的情况去查一些资料，然后对该基因分析并优化。
目的基因不一样，一般来说诱导表达的条件也不一样，与宿主细胞的关系不算太大
表达最佳菌株重点有很多，但比较主要的是诱导表达条件的筛选，一般的蛋白表达纯化对于表达条件都需要进行梯度筛选，摸索最优表达情况，这个最麻烦了。。。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
6楼2015-10-12 17:07:54
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tolobio

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
Deng_Cheng: 金币+1 2015-10-19 15:11:59
建议送到公司来做，比较快。仪器设备和人员都比较成熟。供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
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7楼2015-10-15 12:37:18
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