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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教ＰＣＲ问题
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gmdp

金虫 (小有名气)

[交流] 请教ＰＣＲ问题

我做ＳＳＲ标记时遇到一个情况，一个引物扩群体一开始扩的很好，连续扩几天后就效果越来越差，不明白是什么原因。有没有污染的原因啊？
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1楼 2008-09-04 18:01:48
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ntill

银虫 (小有名气)
★
gmdp(金币+1,VIP+0):是同一个引物。并且DNA是每次都在换的。我实地搞不清楚了，遇到好几次这种情况了
一个引物扩群体一开始扩的很好，连续扩几天后就效果越来越差。

同一个引物？？什么样的效果？？？
首先要介绍清楚大家才能帮你分析
当然，各个实验室的情况都不同，最好问问同实验室同样做PCR的同学的意见更有参考价值。我们外面的人就只能猜是什么样的原因了
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天哪，什么时候才能有100个金币啊！
4楼2008-09-04 21:12:43
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lzhbio2005

金虫 (小有名气)
★ ★
gmdp(金币+1,VIP+0):因为我在做群体，DNA是一直在换的（每次的DNA都不一样）。所以不太可能是DNA的原因吧？
gmdp(金币+1,VIP+0):谢谢。因为我在做群体，DNA是一直在换的（每次的DNA都不一样）。所以不太可能是DNA的原因吧？
不是污染的原因，是因为每个培养皿上能挑的斑数是有数的。如果你都挑出来，肯定会有重复的。后来的结果不好也很正常。可能是你没有转化进去吧。
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2008-09-04 18:08:12
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
★ ★
gmdp(金币+1,VIP+0):是同一个引物。并且DNA是每次都在换的。我实地搞不清楚了，遇到好几次这种情况了
gmdp(金币+1,VIP+0):谢谢。因为我在做群体，DNA是一直在换的（每次的DNA都不一样）。所以不太可能是DNA的原因吧？
如果扩增条件都一样，后来不好，那可能是模板的问题了。
如果说污染，可能是引物了？（如果你一直在用一种引物，不大可能污染）
要不换换PCR用的东西了，镁离子、dntp、酶、buffer。
还有PCR仪稳定吗？程序没问题吧？
做的时候注意，不要让酶失活了。
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3楼2008-09-04 18:59:58
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