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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gmdp

金虫 (小有名气)

[交流] 请教PCR问题

我做SSR标记时遇到一个情况,一个引物扩群体一开始扩的很好,连续扩几天后就效果越来越差,不明白是什么原因。有没有污染的原因啊?
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lzhbio2005

金虫 (小有名气)

★ ★
gmdp(金币+1,VIP+0):因为我在做群体,DNA是一直在换的(每次的DNA都不一样)。所以不太可能是DNA的原因吧?
gmdp(金币+1,VIP+0):谢谢。因为我在做群体,DNA是一直在换的(每次的DNA都不一样)。所以不太可能是DNA的原因吧?
不是污染的原因,是因为每个培养皿上能挑的斑数是有数的。如果你都挑出来,肯定会有重复的。后来的结果不好也很正常。可能是你没有转化进去吧。
2楼2008-09-04 18:08:12
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

★ ★
gmdp(金币+1,VIP+0):是同一个引物。并且DNA是每次都在换的。我实地搞不清楚了,遇到好几次这种情况了
gmdp(金币+1,VIP+0):谢谢。因为我在做群体,DNA是一直在换的(每次的DNA都不一样)。所以不太可能是DNA的原因吧?
如果扩增条件都一样,后来不好,那可能是模板的问题了。
如果说污染,可能是引物了?(如果你一直在用一种引物,不大可能污染)
要不换换PCR用的东西了,镁离子、dntp、酶、buffer。
还有PCR仪稳定吗?程序没问题吧?
做的时候注意,不要让酶失活了。
3楼2008-09-04 18:59:58
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ntill

银虫 (小有名气)


gmdp(金币+1,VIP+0):是同一个引物。并且DNA是每次都在换的。我实地搞不清楚了,遇到好几次这种情况了
一个引物扩群体一开始扩的很好,连续扩几天后就效果越来越差。

同一个引物??什么样的效果???
首先要介绍清楚大家才能帮你分析
当然,各个实验室的情况都不同,最好问问同实验室同样做PCR的同学的意见更有参考价值。我们外面的人就只能猜是什么样的原因了
天哪,什么时候才能有100个金币啊!
4楼2008-09-04 21:12:43
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