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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式pcr第一轮电泳没有产物，还能进行第二轮么？
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crescent010

铁虫 (初入文坛)

[求助] 巢式pcr第一轮电泳没有产物，还能进行第二轮么？ 已有1人参与

一直在做race克隆基因，一直片段是转录组测出来的不完整片段。
实验室常用的方法是巢式+降落，每一轮巢式都是套着降落做的。
之前的师兄师姐都有克出来目的基因。
我是做转录因子的，一般第一轮很少会扩出条带，基本上没有条带。但是第二轮能扩出来，可是回收后测序都不是我要的目的片段。
请问是不是巢式一定要第一轮扩出条带，才能进行第二轮？
还有我第一轮扩不出条带是模板的问题还是引物的问题？或是其他原因。
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1楼 2015-10-10 15:44:51
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 越加油 at 2015-10-10 17:28:38
一轮没有条带，可以进行二轮扩增。但是race实验不太好做，加油，本人做了半年没有任何结果~~

一轮产物需要稀释吗？
需要胶回收吗？有好多条带

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5楼2016-06-09 21:06:59
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越加油

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
crescent010: 金币+2, ★有帮助 2015-10-11 23:07:54
一轮没有条带，可以进行二轮扩增。但是race实验不太好做，加油，本人做了半年没有任何结果~~
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2楼2015-10-10 17:28:38
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
必须二轮，二轮才能确定

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3楼2015-10-10 20:48:32
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crescent010

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 越加油 at 2015-10-10 17:28:38
一轮没有条带，可以进行二轮扩增。但是race实验不太好做，加油，本人做了半年没有任何结果~~

我做了快一年了，没有任何结果
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4楼2015-10-11 23:07:36
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