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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 大家能不能帮我看下这个图,有哪些问题,谢谢啦!

如题,
1、使用仪器ABI7300
2、只做了一个样本,四个重复检测孔,两个阴性对照,还没有做标准品
3、模板浓度80ng/uL,加了1微升
4、图中所示CT值为27,是不是太大了,需要加大模板量吗?
5、平台期最终扩增量不同,也许是加样过程中的问题,这样的结果可以用吗?

大家能不能帮我看下这个图,有哪些问题,谢谢啦!
IMG_20150925_122006.jpg
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runye2015

新虫 (小有名气)

还有其他的问题吗?新手,求各位大神不吝赐教!
2楼2015-10-04 00:23:11
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runye2015: 金币+1 2015-10-04 20:18:23
3楼2015-10-04 00:49:20
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runye2015

新虫 (小有名气)

各位大神~请驻足一观!

发自小木虫Android客户端
4楼2015-10-04 20:18:16
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
runye2015: 金币+5 2015-10-04 23:00:56
主要指标不是看这个,一个是看ct值的技术重复怎么样,还要看溶解曲线是否有引物二聚体和非特异扩增

发自小木虫Android客户端
5楼2015-10-04 22:50:20
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runye2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 凡人凡语1 at 2015-10-04 22:50:20
主要指标不是看这个,一个是看ct值的技术重复怎么样,还要看溶解曲线是否有引物二聚体和非特异扩增

嗯,我这个图的重复性还行吧~

发自小木虫Android客户端
6楼2015-10-04 23:01:19
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zgb1982

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
runye2015: 金币+3 2015-10-05 00:01:46
问题很大,阴性对照怎么ct27

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-10-04 23:35:19
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hanfusu

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
七楼说得对,怎么阴性对照和样本Ct值都27

发自小木虫Android客户端
8楼2015-10-04 23:41:52
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凡人凡语1 at 2015-10-04 22:50:20
主要指标不是看这个,一个是看ct值的技术重复怎么样,还要看溶解曲线是否有引物二聚体和非特异扩增

重复性是看四个孔的标准差,一般要求小于0.25。软件都回直接给出,你点击前面几个结果内容看看,里面有。还有就是楼上所说的阴性对照的问题,阴性对照一般是不加模板(其他都要加),平常不会出现扩增曲线,有的也可能有一点但大多都大于35个ct了,不知道是不是你设置错了。

发自小木虫Android客户端
9楼2015-10-04 23:53:44
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iternol

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
runye2015: 金币+1 2015-10-05 00:20:45
runye2015: 金币+4 2015-10-05 00:21:10
问题很大。
第一,阴性对照为什么有cycle值?正常阴性对照应该是一条平线。
第二,你的四个副孔严格说来四条曲线应该是重合的。
第三,模板1ul太少。因为你的ct值略大,可以适当增加模板量,比如增加到2ul,既能减小ct值又能减小加样误差。
10楼2015-10-04 23:59:43
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