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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大家能不能帮我看下这个图，有哪些问题，谢谢啦！
汕头大学海洋科学接受调剂
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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 大家能不能帮我看下这个图，有哪些问题，谢谢啦！

如题，
1、使用仪器ABI7300
2、只做了一个样本，四个重复检测孔，两个阴性对照，还没有做标准品
3、模板浓度80ng/uL,加了1微升
4、图中所示CT值为27，是不是太大了，需要加大模板量吗？
5、平台期最终扩增量不同，也许是加样过程中的问题，这样的结果可以用吗？

大家能不能帮我看下这个图，有哪些问题，谢谢啦！
IMG_20150925_122006.jpg
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1楼 2015-10-04 00:22:28
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runye2015

新虫 (小有名气)
还有其他的问题吗？新手，求各位大神不吝赐教！
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2楼2015-10-04 00:23:11
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stl409
★
runye2015: 金币+1 2015-10-04 20:18:23
3楼2015-10-04 00:49:20
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runye2015

新虫 (小有名气)
各位大神～请驻足一观！

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4楼2015-10-04 20:18:16
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
runye2015: 金币+5 2015-10-04 23:00:56
主要指标不是看这个，一个是看ct值的技术重复怎么样，还要看溶解曲线是否有引物二聚体和非特异扩增

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5楼2015-10-04 22:50:20
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runye2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凡人凡语1 at 2015-10-04 22:50:20
主要指标不是看这个，一个是看ct值的技术重复怎么样，还要看溶解曲线是否有引物二聚体和非特异扩增

嗯，我这个图的重复性还行吧～

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6楼2015-10-04 23:01:19
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
runye2015: 金币+3 2015-10-05 00:01:46
问题很大，阴性对照怎么ct27

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7楼2015-10-04 23:35:19
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hanfusu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
七楼说得对，怎么阴性对照和样本Ct值都27

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8楼2015-10-04 23:41:52
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凡人凡语1 at 2015-10-04 22:50:20
主要指标不是看这个，一个是看ct值的技术重复怎么样，还要看溶解曲线是否有引物二聚体和非特异扩增

重复性是看四个孔的标准差，一般要求小于0.25。软件都回直接给出，你点击前面几个结果内容看看，里面有。还有就是楼上所说的阴性对照的问题，阴性对照一般是不加模板（其他都要加），平常不会出现扩增曲线，有的也可能有一点但大多都大于35个ct了，不知道是不是你设置错了。

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9楼2015-10-04 23:53:44
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iternol

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
runye2015: 金币+1 2015-10-05 00:20:45
runye2015: 金币+4 2015-10-05 00:21:10
问题很大。
第一，阴性对照为什么有cycle值？正常阴性对照应该是一条平线。
第二，你的四个副孔严格说来四条曲线应该是重合的。
第三，模板1ul太少。因为你的ct值略大，可以适当增加模板量，比如增加到2ul，既能减小ct值又能减小加样误差。
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10楼2015-10-04 23:59:43
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