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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 大家能不能帮我看下这个图,有哪些问题,谢谢啦!

如题,
1、使用仪器ABI7300
2、只做了一个样本,四个重复检测孔,两个阴性对照,还没有做标准品
3、模板浓度80ng/uL,加了1微升
4、图中所示CT值为27,是不是太大了,需要加大模板量吗?
5、平台期最终扩增量不同,也许是加样过程中的问题,这样的结果可以用吗?

大家能不能帮我看下这个图,有哪些问题,谢谢啦!
IMG_20150925_122006.jpg
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iternol

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
runye2015: 金币+1 2015-10-05 00:20:45
runye2015: 金币+4 2015-10-05 00:21:10
问题很大。
第一,阴性对照为什么有cycle值?正常阴性对照应该是一条平线。
第二,你的四个副孔严格说来四条曲线应该是重合的。
第三,模板1ul太少。因为你的ct值略大,可以适当增加模板量,比如增加到2ul,既能减小ct值又能减小加样误差。
10楼2015-10-04 23:59:43
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iternol

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by runye2015 at 2015-10-05 00:20:00
加样的时候按照说明书讲的,最多100ng,加之前还把样本稀释了10倍,取了一微升,嗯,把样本量多加一些,再做一下试试!
阴性对照有扩增~是不是污染的可能性大一些
谢谢您的回复!
...

看了你的ct值,可能基因表达丰度不是很高,也可能是你稀释的太多了。你可以把反转录后的CDNA稀释2-4倍,加2ul。
13楼2015-10-05 01:50:37
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