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runye2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zgb1982 at 2015-10-04 23:35:19
问题很大,阴性对照怎么ct27

哦~和污染有关系吗?~~设置阴性对照有什么意义吗~正常来讲应该是什么样的啊~谢谢您的回复!

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11楼2015-10-05 00:02:50
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runye2015

新虫 (小有名气)

加样的时候按照说明书讲的,最多100ng,加之前还把样本稀释了10倍,取了一微升,嗯,把样本量多加一些,再做一下试试!
阴性对照有扩增~是不是污染的可能性大一些
谢谢您的回复!

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12楼2015-10-05 00:20:00
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iternol

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by runye2015 at 2015-10-05 00:20:00
加样的时候按照说明书讲的,最多100ng,加之前还把样本稀释了10倍,取了一微升,嗯,把样本量多加一些,再做一下试试!
阴性对照有扩增~是不是污染的可能性大一些
谢谢您的回复!
...

看了你的ct值,可能基因表达丰度不是很高,也可能是你稀释的太多了。你可以把反转录后的CDNA稀释2-4倍,加2ul。
13楼2015-10-05 01:50:37
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lxc374

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你看下ct值分析下显著性,看下有没有显著性有就不对了,把4个中的误差大的还得剔除,ct值在30循环之内都可以用

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14楼2015-10-05 09:16:25
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如五楼所说,这个图的信息不多,很多还不能确定。仔细看一遍ABI的册子吧,上面讲的很仔细,看完了再分析你的结果,

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CestLaVie
15楼2015-10-05 10:03:54
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
话说回来,问题是很大,就是空白对照的ct问题,但确定一下是不是非特异扩增、是不是程序设置(比如检测信号的时间点)、加样错误或者阈值/基线设置等等原因为头等大事,单凭这个图信息量远远不够。细查实验记录和程序设置,参考手册找找原因。

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CestLaVie
16楼2015-10-05 10:10:49
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
也不排除基因表达很低或者反转不好以及加样太少,而引物二聚体有偏多,同时阈值线调得较低的可能。ct如果不是软件自动设置而且引物扩增异常(扩增效率低、模板浓度低),这种情况下没有参考价值。

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CestLaVie
17楼2015-10-05 10:14:50
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