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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大家能不能帮我看下这个图，有哪些问题，谢谢啦！
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runye2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zgb1982 at 2015-10-04 23:35:19
问题很大，阴性对照怎么ct27

哦～和污染有关系吗？～～设置阴性对照有什么意义吗～正常来讲应该是什么样的啊～谢谢您的回复！

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11楼2015-10-05 00:02:50
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runye2015

新虫 (小有名气)
加样的时候按照说明书讲的，最多100ng,加之前还把样本稀释了10倍，取了一微升，嗯，把样本量多加一些，再做一下试试！
阴性对照有扩增～是不是污染的可能性大一些
谢谢您的回复！

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12楼2015-10-05 00:20:00
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iternol

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
12楼: Originally posted by runye2015 at 2015-10-05 00:20:00
加样的时候按照说明书讲的，最多100ng,加之前还把样本稀释了10倍，取了一微升，嗯，把样本量多加一些，再做一下试试！
阴性对照有扩增～是不是污染的可能性大一些
谢谢您的回复！
...

看了你的ct值，可能基因表达丰度不是很高，也可能是你稀释的太多了。你可以把反转录后的CDNA稀释2-4倍，加2ul。
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13楼2015-10-05 01:50:37
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lxc374

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你看下ct值分析下显著性，看下有没有显著性有就不对了，把4个中的误差大的还得剔除，ct值在30循环之内都可以用

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14楼2015-10-05 09:16:25
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jackyoung

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如五楼所说，这个图的信息不多，很多还不能确定。仔细看一遍ABI的册子吧，上面讲的很仔细，看完了再分析你的结果，

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CestLaVie
15楼2015-10-05 10:03:54
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jackyoung

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
话说回来，问题是很大，就是空白对照的ct问题，但确定一下是不是非特异扩增、是不是程序设置（比如检测信号的时间点）、加样错误或者阈值/基线设置等等原因为头等大事，单凭这个图信息量远远不够。细查实验记录和程序设置，参考手册找找原因。

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CestLaVie
16楼2015-10-05 10:10:49
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jackyoung

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
也不排除基因表达很低或者反转不好以及加样太少，而引物二聚体有偏多，同时阈值线调得较低的可能。ct如果不是软件自动设置而且引物扩增异常（扩增效率低、模板浓度低），这种情况下没有参考价值。

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CestLaVie
17楼2015-10-05 10:14:50
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