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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 大家能不能帮我看下这个图,有哪些问题,谢谢啦!

如题,
1、使用仪器ABI7300
2、只做了一个样本,四个重复检测孔,两个阴性对照,还没有做标准品
3、模板浓度80ng/uL,加了1微升
4、图中所示CT值为27,是不是太大了,需要加大模板量吗?
5、平台期最终扩增量不同,也许是加样过程中的问题,这样的结果可以用吗?

大家能不能帮我看下这个图,有哪些问题,谢谢啦!
IMG_20150925_122006.jpg
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如五楼所说,这个图的信息不多,很多还不能确定。仔细看一遍ABI的册子吧,上面讲的很仔细,看完了再分析你的结果,

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CestLaVie
15楼2015-10-05 10:03:54
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
话说回来,问题是很大,就是空白对照的ct问题,但确定一下是不是非特异扩增、是不是程序设置(比如检测信号的时间点)、加样错误或者阈值/基线设置等等原因为头等大事,单凭这个图信息量远远不够。细查实验记录和程序设置,参考手册找找原因。

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CestLaVie
16楼2015-10-05 10:10:49
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
也不排除基因表达很低或者反转不好以及加样太少,而引物二聚体有偏多,同时阈值线调得较低的可能。ct如果不是软件自动设置而且引物扩增异常(扩增效率低、模板浓度低),这种情况下没有参考价值。

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CestLaVie
17楼2015-10-05 10:14:50
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