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whb21

木虫 (著名写手)

[交流] sp阳离子交换纯化蛋白质 已有5人参与

小弟刚刚接触蛋白纯化 最近使用sp柱纯化蛋白质 pi11左右 loading buffer ph6.6 使用含500mm的nacl loading buffer 漂洗 1m nacl 洗脱 有明显的漂洗峰和洗脱峰 但是sds page 显示 洗脱组分杂带非常多 求大师指点

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whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 麦子果树 at 2015-10-01 16:53:17
那是由于收集的洗脱组分的蛋白依然不纯,所以就有很多杂带吧

是啊 我比较不理解的是 500mm nacl漂洗后 杂蛋白依然在柱子上 这是怎么回事呢

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4楼2015-10-01 19:00:13
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麦子果树

新虫 (小有名气)


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那是由于收集的洗脱组分的蛋白依然不纯,所以就有很多杂带吧
2楼2015-10-01 16:53:17
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麦子果树

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
另外,我想请教一下,你做sds-page时,用的是收集的洗脱蛋白溶液,测了其中的蛋白浓度吗?还有其中的nacl影响电泳结果吗?
3楼2015-10-01 16:55:52
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麦子果树

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by whb21 at 2015-10-01 19:00:13
是啊 我比较不理解的是 500mm nacl漂洗后 杂蛋白依然在柱子上 这是怎么回事呢
...

各种蛋白质的例子吸附能力不一样,可能还有比你的目标蛋白吸附能力更强的蛋白
5楼2015-10-02 08:57:58
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