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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » sp阳离子交换纯化蛋白质
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whb21

木虫 (著名写手)

[交流] sp阳离子交换纯化蛋白质 已有5人参与

小弟刚刚接触蛋白纯化 最近使用sp柱纯化蛋白质 pi11左右 loading buffer ph6.6 使用含500mm的nacl loading buffer 漂洗 1m nacl 洗脱 有明显的漂洗峰和洗脱峰 但是sds page 显示 洗脱组分杂带非常多 求大师指点

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1楼 2015-10-01 12:27:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

麦子果树

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
另外，我想请教一下，你做sds-page时，用的是收集的洗脱蛋白溶液，测了其中的蛋白浓度吗？还有其中的nacl影响电泳结果吗？
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3楼2015-10-01 16:55:52
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普通回帖

麦子果树

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那是由于收集的洗脱组分的蛋白依然不纯，所以就有很多杂带吧
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2楼2015-10-01 16:53:17
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 麦子果树 at 2015-10-01 16:53:17
那是由于收集的洗脱组分的蛋白依然不纯，所以就有很多杂带吧

是啊 我比较不理解的是 500mm nacl漂洗后 杂蛋白依然在柱子上 这是怎么回事呢

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4楼2015-10-01 19:00:13
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麦子果树

新虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼: Originally posted by whb21 at 2015-10-01 19:00:13
是啊 我比较不理解的是 500mm nacl漂洗后 杂蛋白依然在柱子上 这是怎么回事呢
...

各种蛋白质的例子吸附能力不一样，可能还有比你的目标蛋白吸附能力更强的蛋白
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5楼2015-10-02 08:57:58
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备注_可爱

金虫 (初入文坛)
★
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请问，现在解决了吗

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wenyi2015
6楼2016-09-01 11:04:38
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备注_可爱

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 麦子果树 at 2015-10-01 16:55:52
另外，我想请教一下，你做sds-page时，用的是收集的洗脱蛋白溶液，测了其中的蛋白浓度吗？还有其中的nacl影响电泳结果吗？

请问，你的现在解决了吗

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7楼2016-09-01 11:05:35
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
洗脱组分中含有杂带多主要有两个原因，一个是你洗涤也就是漂洗的不够充分，再一个是你的样品组分除了目标蛋白还有其他的蛋白也带正电荷。可以试试洗脱的时候依次增加盐浓度进行梯度洗脱，例如0.5M，1M，1.5M，2M。依次收集电泳。祝你顺利。
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wenyi2015
8楼2016-09-02 14:54:04
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MR_zang

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
优化洗脱条件之后看看效果，不行的话再sp的基础上加上别的纯化手段啊
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9楼2016-09-02 17:04:04
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 备注_可爱 at 2016-09-01 11:04:38
请问，现在解决了吗

已经解决了

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10楼2016-09-08 08:44:29
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