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ted790110铜虫 (初入文坛)
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[求助]
引子设计逻辑? 证明template是mRNA?
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快被老板搞疯了 最近在做RT(reversetranscription不是real time) - PCR 材料是突变的原核杆菌，没有内外显子问题。 有拿去定序，结果在一个表现基因(暂称X基因) 末段缺了一小部份， 连同terminator sequence都没了。 就在猜会不会X基因的terminator sequence没了，transcription会接续到下一个表现基因(暂称Y基因)， 然后做出X、Y基因连在一起的mRNA。 于是开始设计第一对A引子 小弟是在X基因放一个forward，Y基因放一个reverse，如果X、Y基因连在一起做mRNA，PCR就会有东西(第3条)； 如果是正常的，X、Y基因就是分开两条的mRNA，PCR不出东西(第1、2条)。 因为正常的mRNA用A引子做RT-PCR没有东西 没办法知道是否真的有X、Y基因的mRNA (第1、2条)， 于是在X基因中设计一对B引子(第5、6、7条)，Y基因中设计一对C引子(第9、10、11条) 证明X、Y基因是否有transcription出mRNA。 (第4、8、12条是NC) 结果老板说我的RT-PCR结果无法让人信服是以mRNA为template。  这要怎么让人信服啊?  AUTO6762.jpg |
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