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山水88

木虫 (正式写手)

[求助] 不同色谱柱样品与标准品对应峰差异已有3人参与

最近做实验遇到了一个奇怪的现象:
1、用250mm 10um色谱柱跑HPLC,样品中出现了3个峰,其中1、2与两个标准品对应,3是未知化合物,向样品中添加标准品也是1、2峰面积有所增长。
2、用150mm 5um色谱柱跑HPLC,样品中出现了3个峰,其中1、3与两个标准品对应,2是未知化合物,向样品中添加标准品也是1、3峰面积有所增长。
根据峰面积峰形判断,两个柱子中的3个峰的排列顺序没有变化,两个柱子是同一厂家生产,填料相同的C18柱,仅是长度粒径不同,请问各位出现这种现象会有什么原因呢?谢谢大家了
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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by klicking at 2015-10-01 09:47:45
怎么感觉峰3(或150 mm的峰2)是空白带来的,进过空白么?

峰3以前是没有的,然后我要的产物是有的,后面随着我的底物的增多,我的产物就没有明显变化了,而峰3却增多,所以才重视起它,底物峰在柱子上能找到,不是峰3
11楼2015-10-01 11:19:39
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匿名

用户注销 (知名作家)

精修问题可私信


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山水88: 金币+5, 有帮助 2015-10-08 08:51:40
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2楼2015-09-29 13:58:56
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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山水88: 金币+5, 有帮助 2015-10-08 08:51:51
引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-09-28 21:58:56
分析用基本都是5um,3um和1.7um的填料,为啥要用个10um的填料呢?

10um在制备柱里还是常见的。

不同颗粒度柱子的最佳线性流速是不同的,每一个化合物对温度和流速的反应也不一定相同。你看来刚好赶上了一个反应比较大的。
3楼2015-09-29 14:36:48
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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-09-29 13:58:56
分析用基本都是5um,3um和1.7um的填料,为啥要用个10um的填料呢?

我不是做分析的,做代谢产物,然后前面都用10um的柱子,只是因为出现了一个不明峰所以拿去做LC-MS,但是用他们的柱子(应该粒径小些)就跑出来峰对应不上了,不过他们是完全对不上,于是回来拿自己的5um试验,出现了这种结果,我的两个标准品是顺反式异构,紫外条件下可互相转换的。
4楼2015-09-29 16:43:49
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