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山水88

木虫 (正式写手)

[求助] 不同色谱柱样品与标准品对应峰差异 已有3人参与

最近做实验遇到了一个奇怪的现象:
1、用250mm 10um色谱柱跑HPLC,样品中出现了3个峰,其中1、2与两个标准品对应,3是未知化合物,向样品中添加标准品也是1、2峰面积有所增长。
2、用150mm 5um色谱柱跑HPLC,样品中出现了3个峰,其中1、3与两个标准品对应,2是未知化合物,向样品中添加标准品也是1、3峰面积有所增长。
根据峰面积峰形判断,两个柱子中的3个峰的排列顺序没有变化,两个柱子是同一厂家生产,填料相同的C18柱,仅是长度粒径不同,请问各位出现这种现象会有什么原因呢?谢谢大家了
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

你其实已经有答案了:10um柱子加标样后1,2增加,说明1,2是你的化合物,3是一个新峰;5um柱子加标样后1,3峰增加,说明1,3是你的化合物,2是新峰。至于峰形和积分面积需要看差别有多少。相差不多时不能作为判断依据的。

发自小木虫Android客户端
8楼2015-09-30 21:34:21
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用户注销 (知名作家)

精修问题可私信


★ ★ ★ ★ ★
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山水88: 金币+5, 有帮助 2015-10-08 08:51:40
本帖仅楼主可见
2楼2015-09-29 13:58:56
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
山水88: 金币+5, 有帮助 2015-10-08 08:51:51
引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-09-28 21:58:56
分析用基本都是5um,3um和1.7um的填料,为啥要用个10um的填料呢?

10um在制备柱里还是常见的。

不同颗粒度柱子的最佳线性流速是不同的,每一个化合物对温度和流速的反应也不一定相同。你看来刚好赶上了一个反应比较大的。
3楼2015-09-29 14:36:48
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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-09-29 13:58:56
分析用基本都是5um,3um和1.7um的填料,为啥要用个10um的填料呢?

我不是做分析的,做代谢产物,然后前面都用10um的柱子,只是因为出现了一个不明峰所以拿去做LC-MS,但是用他们的柱子(应该粒径小些)就跑出来峰对应不上了,不过他们是完全对不上,于是回来拿自己的5um试验,出现了这种结果,我的两个标准品是顺反式异构,紫外条件下可互相转换的。
4楼2015-09-29 16:43:49
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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-29 14:36:48
10um在制备柱里还是常见的。

不同颗粒度柱子的最佳线性流速是不同的,每一个化合物对温度和流速的反应也不一定相同。你看来刚好赶上了一个反应比较大的。...

我的标准品是顺反式异构,紫外条件下可互相转换的,虽然说性质可能不稳定,但灯光、常温下还是影响不大的。关键 是不同的柱子对应标准品峰不同,加了标准品后也是对应峰面积增加,直接摸不清楚状况了。
5楼2015-09-29 16:47:00
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
山水88: 金币+5, 有帮助 2015-10-08 08:51:59
你确定是相同填料?光说C18不等于相同填料。每一个牌子的衍生方法和封端基方法都不尽相同,之间没有多少可比性。

发自小木虫Android客户端
6楼2015-09-30 15:20:02
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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-30 15:20:02
你确定是相同填料?光说C18不等于相同填料。每一个牌子的衍生方法和封端基方法都不尽相同,之间没有多少可比性。

这个是可以确定的,关键是加了标准品后也是对应峰面积增加,这个怎么解释呢
7楼2015-09-30 15:45:48
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至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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山水88: 金币+5, 有帮助 2015-10-08 08:52:10
怎么感觉峰3(或150 mm的峰2)是空白带来的,进过空白么?
归零
9楼2015-10-01 09:47:45
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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-30 21:34:21
你其实已经有答案了:10um柱子加标样后1,2增加,说明1,2是你的化合物,3是一个新峰;5um柱子加标样后1,3峰增加,说明1,3是你的化合物,2是新峰。至于峰形和积分面积需要看差别有多少。相差不多时不能作为判断依 ...

我是有两个样品的,其中一个相差不大,另外一个相差特别大的,都做了同样的试验,都是同样的结果,所以就很迷惑了
10楼2015-10-01 11:13:53
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