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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » 不同色谱柱样品与标准品对应峰差异
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山水88

木虫 (正式写手)

[求助] 不同色谱柱样品与标准品对应峰差异 已有3人参与

最近做实验遇到了一个奇怪的现象：
1、用250mm 10um色谱柱跑HPLC，样品中出现了3个峰，其中1、2与两个标准品对应，3是未知化合物，向样品中添加标准品也是1、2峰面积有所增长。
2、用150mm 5um色谱柱跑HPLC，样品中出现了3个峰，其中1、3与两个标准品对应，2是未知化合物，向样品中添加标准品也是1、3峰面积有所增长。
根据峰面积峰形判断，两个柱子中的3个峰的排列顺序没有变化，两个柱子是同一厂家生产，填料相同的C18柱，仅是长度粒径不同，请问各位出现这种现象会有什么原因呢？谢谢大家了
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1楼 2015-09-28 14:32:13
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
山水88: 金币+5, ★有帮助 2015-10-08 08:51:51
引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-09-28 21:58:56
分析用基本都是5um，3um和1.7um的填料，为啥要用个10um的填料呢？

10um在制备柱里还是常见的。

不同颗粒度柱子的最佳线性流速是不同的，每一个化合物对温度和流速的反应也不一定相同。你看来刚好赶上了一个反应比较大的。
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3楼2015-09-29 14:36:48
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匿名

用户注销 (知名作家)

精修问题可私信
★ ★ ★ ★ ★
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山水88: 金币+5, ★有帮助 2015-10-08 08:51:40
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2楼2015-09-29 13:58:56
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山水88

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-09-29 13:58:56
分析用基本都是5um，3um和1.7um的填料，为啥要用个10um的填料呢？

我不是做分析的，做代谢产物，然后前面都用10um的柱子，只是因为出现了一个不明峰所以拿去做LC-MS，但是用他们的柱子（应该粒径小些）就跑出来峰对应不上了，不过他们是完全对不上，于是回来拿自己的5um试验，出现了这种结果，我的两个标准品是顺反式异构，紫外条件下可互相转换的。
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4楼2015-09-29 16:43:49
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山水88

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-29 14:36:48
10um在制备柱里还是常见的。

不同颗粒度柱子的最佳线性流速是不同的，每一个化合物对温度和流速的反应也不一定相同。你看来刚好赶上了一个反应比较大的。...

我的标准品是顺反式异构，紫外条件下可互相转换的，虽然说性质可能不稳定，但灯光、常温下还是影响不大的。关键 是不同的柱子对应标准品峰不同，加了标准品后也是对应峰面积增加，直接摸不清楚状况了。
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5楼2015-09-29 16:47:00
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