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2011@xmc

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位大神怎么避免做质粒的标准曲线时空白对照的污染? 已有1人参与

各位大神,我正在做质粒的标准曲线的绝对定量,但是每次都会在空白对照中有污染。循环数降到35就达不到平台期了,然后换了个一直没做实验的实验室也会有污染,所有的试剂耗材(除了DNA)在紫外线下照射、加上矿物油也会有污染。跪求各位大神提提意见,怎么避免污染吖,才开始做定量pcr不久,老师催的急。。。。图中标红色的对应H12和A1是空白对照,其他的是按10倍浓度梯度(从100ng/μl开始)稀释的质粒。

各位大神怎么避免做质粒的标准曲线时空白对照的污染?
图中标红色的对应H12和A1是空白对照


各位大神怎么避免做质粒的标准曲线时空白对照的污染?-1
图中标红色的对应H12和A1是空白对照
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zgb1982

木虫 (正式写手)

考虑试剂本身背景太强?

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-09-28 17:19:40
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zgb1982

木虫 (正式写手)

3楼2015-09-28 17:20:24
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zgb1982

木虫 (正式写手)

4楼2015-09-28 17:21:29
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2011@xmc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zgb1982 at 2015-09-28 17:20:24
熔解曲线?

空白对照的熔解曲线和阳性低浓度的一样。
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5楼2015-09-28 21:42:42
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2011@xmc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zgb1982 at 2015-09-28 17:21:29
有没有不加引物的对照

不加引物的,因为我每次加的SYBR Green MIX和水都是新的。所以,不加引物肯定是没有条带的。而且,实验室的其他同学做的时候和我只是引物加的不一样,不会出现污染。估计是我这个内参引物太容易扩增了。
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6楼2015-09-28 21:47:09
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zgb1982

木虫 (正式写手)

7楼2015-09-29 08:46:43
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zgb1982

木虫 (正式写手)

或者你的引物有问题,片段长度多少

发自小木虫IOS客户端
8楼2015-09-29 08:48:26
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2011@xmc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zgb1982 at 2015-09-29 08:48:26
或者你的引物有问题,片段长度多少

引物片段长度F21/R24。。引物有问题是什么意思?
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9楼2015-09-29 10:24:08
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2011@xmc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zgb1982 at 2015-09-29 08:46:43
试下带UNG的mix

好的。谢谢~~先去问问有没有实验室有没有这种玩意~才来实验室不久。。。
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10楼2015-09-29 11:08:42
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