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李晓伍

新虫 (初入文坛)

[求助] 想问一下土壤DNA的扩增产物能否用来导入大肠杆菌之后做real time PCR的标准品 已有3人参与

我现在想检测土壤DNA中某个功能基因的拷贝数,
能否用PCR的方法将这种功能基因扩增出来,然后
连接到质粒上,再转移到大肠杆菌中,蓝白筛选后
提取质粒来做标准品啊?
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
完全可以。你可以参考绝对定量real time PCR
4楼2015-09-28 23:34:16
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李晓伍

新虫 (初入文坛)

就是直接用土壤DNA来扩增,会不会因为土壤DNA中杂质很多,造成其他DNA进入到质粒中造成错误的阳性克隆啊
2楼2015-09-28 10:22:48
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clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-28 22:54:25
完全可以。不过你说的也对,所以你连到质粒上之后最好做一个测序,这样就能确定是不是你想要的基因了。
3楼2015-09-28 20:14:15
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二月smile

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以哒,质粒提出来后,先以所提质粒为模板扩增一下,看是否能扩出目的条带,初步验证后,拿去测下序,确定其为所需质粒再用。
5楼2015-09-29 21:22:09
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