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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 想问一下土壤DNA的扩增产物能否用来导入大肠杆菌之后做real time PCR的标准品
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李晓伍

新虫 (初入文坛)

[求助] 想问一下土壤DNA的扩增产物能否用来导入大肠杆菌之后做real time PCR的标准品 已有3人参与

我现在想检测土壤DNA中某个功能基因的拷贝数，
能否用PCR的方法将这种功能基因扩增出来，然后
连接到质粒上，再转移到大肠杆菌中，蓝白筛选后
提取质粒来做标准品啊？
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1楼 2015-09-28 10:10:10
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李晓伍

新虫 (初入文坛)
就是直接用土壤DNA来扩增，会不会因为土壤DNA中杂质很多，造成其他DNA进入到质粒中造成错误的阳性克隆啊
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2楼2015-09-28 10:22:48
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clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-28 22:54:25
完全可以。不过你说的也对，所以你连到质粒上之后最好做一个测序，这样就能确定是不是你想要的基因了。
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3楼2015-09-28 20:14:15
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
完全可以。你可以参考绝对定量real time PCR
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4楼2015-09-28 23:34:16
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二月smile

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以哒，质粒提出来后，先以所提质粒为模板扩增一下，看是否能扩出目的条带，初步验证后，拿去测下序，确定其为所需质粒再用。
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5楼2015-09-29 21:22:09
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