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xiamuxi

新虫 (小有名气)

[交流] 克隆相关 已有8人参与

我现在在做分子克隆的实验,骨架和片段都是用ASCI酶切的,大小分别是:6219bp、6422bp,T4连接酶连,16度5、6个小时或者过夜,骨架和片段体积比是1:7,长斑的情况不定,有时多有时少,做菌液电泳有时候有滞后的但酶切检测不对,做了三个多月了,,担心我的毕业望大家给些高见啊
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生活需要信仰。
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iszku

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiamuxi at 2015-09-28 19:08:01
哦?我基本都是切4个小时左右的,怕切不彻底啊。。还有切过这一说啊?怎么检测是不是切过了呢?...

酶切太过了可能会影响下一步的酶连接,通常酶切30-60分钟已经足够

发自小木虫IOS客户端
9楼2015-09-29 00:49:24
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
单酶切?试试载体去磷酸化

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-25 23:23:27
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iszku

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是酶切过了?

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-09-26 03:10:58
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海里的淡水鱼

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼2015-09-26 09:28:30
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