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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 克隆相关
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xiamuxi

新虫 (小有名气)

[交流] 克隆相关 已有8人参与

我现在在做分子克隆的实验，骨架和片段都是用ASCI酶切的，大小分别是：6219bp、6422bp，T4连接酶连，16度5、6个小时或者过夜，骨架和片段体积比是1:7，长斑的情况不定，有时多有时少，做菌液电泳有时候有滞后的但酶切检测不对，做了三个多月了，，担心我的毕业望大家给些高见啊
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生活需要信仰。
1楼 2015-09-25 21:48:31
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iszku

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by xiamuxi at 2015-09-28 19:08:01
哦？我基本都是切4个小时左右的，怕切不彻底啊。。还有切过这一说啊？怎么检测是不是切过了呢？...

酶切太过了可能会影响下一步的酶连接，通常酶切30-60分钟已经足够

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9楼2015-09-29 00:49:24
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查看全部 17 个回答

wuyuanqing

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单酶切？试试载体去磷酸化

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2楼2015-09-25 23:23:27
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iszku

新虫 (初入文坛)
★
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是不是酶切过了？

发自小木虫IOS客户端
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3楼2015-09-26 03:10:58
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海里的淡水鱼

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼2015-09-26 09:28:30
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