| 查看: 1348 | 回复: 16 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
克隆相关 已有8人参与
|
||||
我现在在做分子克隆的实验，骨架和片段都是用ASCI酶切的，大小分别是：6219bp、6422bp，T4连接酶连，16度5、6个小时或者过夜，骨架和片段体积比是1:7，长斑的情况不定，有时多有时少，做菌液电泳有时候有滞后的但酶切检测不对，做了三个多月了， ，担心我的毕业 望大家给些高见啊 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 虫友问答-分子生物 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有166人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
dorecnu
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2336.7
- 红花: 10
- 帖子: 785
- 在线: 93.3小时
- 虫号: 448155
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-28 22:55:11
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-28 22:55:11
|
PCR产物是否是回收后直接酶切？如果是请将片段连到simple 19T载体上之后再酶切。 新手往往觉得我在PCR引物末端设计了酶切位点和保护碱基就万事大吉了，实际经验是NONONO 在载体和片段连接过程中有一个重要的环节是酶切位点是否都完整，PCR产物直接酶切的 弊端是不知道插入 片段酶切位点的状况。先将片段链接到T载体后酶切，可以清楚的获得这一状态。 然后在将载体用碱性磷酸酶去磷酸化后按载体：片段=1：3的比例连接。 先连T载体看起来繁琐，实际上每个过程都能检测，实际上有助于后续实验更快的进行。 连接酶在室温工作挺好，且可以节约时间。 |
7楼2015-09-28 19:44:08
dorecnu
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2336.7
- 红花: 10
- 帖子: 785
- 在线: 93.3小时
- 虫号: 448155
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
13楼2015-09-29 09:10:56
dorecnu
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2336.7
- 红花: 10
- 帖子: 785
- 在线: 93.3小时
- 虫号: 448155
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
15楼2015-10-04 21:11:37