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small_fish银虫 (小有名气)
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[求助]
产物出不来
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我所用的模板GAPDH正常，目的条带出不来。 模板是一年以前用过的，能出结果，条带很亮。为了防止降解，这次还是新和成的 用的是诺唯赞的2*Taq mix（就是混好的那种），之前也是用的这种 怀疑过是mix，换了另一个牌子还是不行，引物也重新和成果，不行。模板稀释倍数从10倍-30倍都试过，不行。 我要疯了 难不成水会有问题？ 我用的是超纯水 还是引物问题 抓狂 mark有点不太清晰 从上到下为 100 200 300 400 500一直到1000  5.jpg |
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dorecnu
木虫 (正式写手)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2015-09-24 20:26:52
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-24 22:31:54
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3楼2015-09-24 20:59:21
small_fish
银虫 (小有名气)
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- 专业: 抗炎与免疫药物药理
4楼2015-09-24 22:36:09
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5楼2015-09-25 16:52:47
| 全是引物二聚体吧，我咋感觉是模板问题或者是退火温度没有摸对，因为一点条带都没有，除了二聚体，所以要不就是模板问题，要不就降低退火温度试试，还有用高特异性酶扩增，你这体系需要提高特异性，如果不行，也可以采取其他方式扩增，比如巢式PCR什么的，只要提高特异性就可以了 （http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html） |
6楼2015-09-29 15:47:54
