应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个基因没有克隆到全长序列可以做实时定量分析吗
101/1返回列表
查看: 1889  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

只如初见蓉

铁虫 (小有名气)

[求助] 一个基因没有克隆到全长序列可以做实时定量分析吗 已有5人参与

大神们：
         求解:如题，在做实时定量PCR时是否需要对象基因必须扩增到全长？为什么?
小弟近期开始进行实时定量方面的工作，由于对象基因的种类较多，全部拿到全长需要太多时间，那么考虑部分片段是否可以进行实时定量。
谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-22 16:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)
不需要，cDNA即可。
回复此楼
2楼2015-09-22 18:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

只如初见蓉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-09-22 18:38:19
不需要，cDNA即可。

也就是说只要有片段就可以了？
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-22 18:46:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

只如初见蓉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-09-22 18:38:19
不需要，cDNA即可。

但是我们老师说实时定量时基于完整序列的。需要其基因全长才行。
请问有没有文献支撑。
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-22 18:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:16:52
只如初见蓉: 金币+3, ★有帮助 2015-10-02 14:32:39
那要看你这部分片段是哪一段？如果是基因中的保守区，而你这个基因又是个基因家族，那显然你根据保守区设计荧光定量引物做定量是不合适的，如果是基因中的可变区或UTR区，那还是可以试试的。
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-22 20:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜀黍爱查房

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你们老师有点水啊，显然不需要
赞一下 回复此楼
他是一个好人
6楼2015-09-23 09:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个要看情况的，如果你这个基因有同源性较高的基因干扰的话，最好看下全长序列。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-23 09:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿里郎爱阿里

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
只如初见蓉: 金币+2, ★有帮助 2015-10-02 14:32:26
若不知道全长的话倒是可以设计引物做定量，但是你引物的质量好不好就很难说了，万一特异性不高，溶解曲线出来好几个峰就思密达了。建议去NCBI上找找，设计引物的时候注意点。祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-23 10:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿里郎爱阿里

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 只如初见蓉 at 2015-09-22 18:47:02
但是我们老师说实时定量时基于完整序列的。需要其基因全长才行。
请问有没有文献支撑。...

不需要全长
回复此楼
9楼2015-09-23 10:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
只如初见蓉: 金币+2, ★有帮助 2015-10-02 14:32:12
你先在软件例如phytozome中找到针对你研究的物种特异性强的目的基因，设计引物，不需要克隆全长，提RNA反转录的cDNA就能做模板,这是实验前期的工作，克隆全长再做的荧光定量一般是实验后期做的，看全长克隆后对基因表达量的影响
赞一下 回复此楼
好好学习，天天向上
10楼2015-09-24 08:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 只如初见蓉 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭